质粒能成功转入植物细胞,并将质粒上的一部分外源DNA整合到植物的DNA中。 下图表示利用质粒进行转化获得的过程。请据图分析回答:
(1)④过程应用的主要生物技术是 ,该技术的理论依据是 。关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行 和 。
(2)过程②需要通过 使质粒与目的基因切口黏合。
(3)组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图(示部分基因及部分限制性内切酶作用位点),据图分析:
①人工改造时,要使抗虫基因表达,还应插入 。
②人工改造时用限制酶II处理,其目的是:第一,去除质粒上的 (基因),保证T—DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长;第二,使质粒带有单一限制酶作用位点,有利于 。第三,使质粒大小合适,可以提高转化效率等。
③若用限制酶I分别切割改造过的理想质粒和带有抗除草剂基因的DNA分子,并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞,观察到的细胞生长的现象是 。
(4)若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的粘性末端为序列,则该酶识别的核苷酸序列是 。
(5)过程③可以采用的方法是 。
(6)为了检测通过④过程获得的幼苗是否具有抗除草剂的特性,可采用的方法是 。