下列实验中，材料必须自始至终保持活性的是：
①观察植物细胞有丝分裂 ②观察植物细胞的质壁分离和质壁分离复原 ③用高倍显微镜观察叶绿体 ④叶绿体中色素的提取和分离   ⑤探究酵母菌细胞的呼吸方式

A．①②

B．②③

C．②③⑤

D．①②③④