萌发的小麦种子中主要有α-淀粉酶(在pH3.6以下迅速失活,但耐热)和β-淀粉酶(不耐热,70℃条件下15min后就失活)。
实验材料:萌发3天的小麦种子
主要器材:麦芽糖标准溶液、5%淀粉溶液、斐林试剂、蒸馏水、恒温水浴锅等
实验目的:测定40℃条件下α-淀粉酶的催化效率
实验步骤:
步骤一:制备不同浓度麦芽糖溶液与斐林试剂生成的标准颜色。取7支洁净试管编号,按表中所示加入试剂,再将试管置于60℃水浴中加热3min,取出后按编号排好。
试剂 |
试管 |
||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
麦芽糖标准溶液(mL) |
0 |
0.2 |
0.6 |
1.0 |
1.4 |
1.6 |
2.0 |
蒸馏水(mL) |
X |
1.8 |
Y |
1.0 |
Z |
0.4 |
0 |
斐林试剂(mL) |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
表中Y代表的数值是______。
步骤二:制取α-淀粉酶溶液
①用_______________________制备淀粉酶溶液。
②将装有淀粉酶溶液的试管置于__________________________,取出后迅速冷却以获得α-淀粉酶溶液。
步骤三:取A、B、C、D四只试管并分别作以下处理。
试管 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
C |
D |
5%淀粉溶液(mL) |
2 |
2 |
2 |
|
|
|
|
|
α-淀粉酶溶液(mL) |
|
|
|
2 |
2 |
2 |
|
2 |
蒸馏水(mL) |
|
|
|
|
|
|
2 |
|
40℃水浴锅中保温(min) |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
步骤四:将A1和B1试管中溶液加入到E1试管中,A2和B2溶液加入到E2试管,A3和B3溶液加入到E3试管, C、D试管中的溶液均加入到F试管中,立即将E1、E2、E3、F试管在40℃水浴锅中保温一段时间。然后分别加入________________,并经过___________________________后,观察颜色变化。
结果分析:将E1、E2、E3试管中的颜色与___________________________进行比较,获得该试管中麦芽糖浓度,并计算出a-淀粉酶的催化效率的平均值。
讨论:
(1)实验中F试管所起的具体作用是排除_______________________对实验结果的干扰从而对结果进行校对。
(2)若要测定β-淀粉酶的活性,则需要对步骤_______进行改变,具体的操作是将_________________________________________一段时间从而获得β-淀粉酶。