(8分)我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛,下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。pBR322质粒为基因工程中经常选用的载体,Ampr表示青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因,该质粒上有限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ的识别和切割位点,如图(已知普通大肠杆菌中不含有pBR322质粒上任何基因;限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同)。回答问题:
(1)过程②为 ,质粒上的抗性基因作用是 。
(2)为防止④过程中出现多种重组质粒,一般用两种限制酶分别对目的基因和质粒进行剪切,从而把目的基因和质粒各自剪切出 (不同/相同)的黏性末端。基因表达载体中目的基因除包含以上所描述的结构外,还必须含有 。
(3)如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ中的任意两种,同时对多个质粒pBR322进行切割,则形成的DNA片段共 种;为提高⑤过程成功率,常用 溶液处理大肠杆菌。
(4)现在用限制酶PstI切割目的基因和质粒pBR322,完成过程④、⑤后,将三角瓶内的大肠杆菌先接种到甲培养基上,形成菌落后用无菌牙签挑取甲上的单个菌落,分别接种到乙和丙两个培养基的相同位置,一段时间后,菌落的生长状况如上图所示。甲培养基上能生长的大肠杆菌中含有 基因,与丙相比,乙培养基中少了两个菌落,说明丙培养基中这两个菌落中的大肠杆菌 。