口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种偶蹄动物传染病,目前常用接种弱毒疫苗的方法预防。疫苗的主要成分是该病毒的一种结构蛋白VPI。科学家尝试利用转基因番茄来生产口蹄疫疫苗,过程如下图1所示。图2表示目的基因与pZHZ1质粒构建重组质粒的过程,E、F、G、H分别为A、B、C、D四种不同限制酶的酶切位点。请据图回答。
(1)口蹄疫病毒的遗传物质为RNA,要获得VPI基因可通过 方法获得。
(2)如图2所示,若限制酶A、B切割出的黏性末端完全不同,那么用这种双酶切的方法构建重组质粒的优点是 。
(3)已知质粒pZHZ1的长度为3.7kb,(1kb=1000对碱基)其中EF区域长度为0.2kb,GE区域长度为0.8kb,FH区域长度为0.5kb。现分别用限制酶C、D切割重组质粒pZHZ2样品,结果被酶C切割成1.6kb和3.1kb两个片段,被酶D切割成1.2kb和3.5kb两个片段。据酶切结果判断VPI基因大小为 kb,并将目的基因内部的酶C、酶D切割位点用相应的字母标注在下图对应位置。
(每小格代表0.1kb)
(4)过程③为了促进土壤农杆菌吸收重组质粒,可用___________处理土壤农杆菌,使其处于感受态。
(5)过程⑥的培养基中除了加入各种必需营养物质和一定浓度的植物激素外,还需要添加 筛选出含有重组质粒的叶片小段。
(6)用PCR方法检测转基因番茄是否含有目的基因时,需根据________________的核苷酸序列设计特异引物,若其中一种引物共用了31个,则含目的基因的番茄DNA最多扩增了__ __次。