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  • 科目:生物
  • 题型:实验题
  • 难度:较难
  • 人气:46

某研究小组将纤维素酶基因(N)插入某种细菌(B1)的基因组中,构建高效降解纤维素的菌株(B2)。该小组在含有N基因的质粒中插入B1基因组的M1M2片段;再经限制酶切割获得含N基因的片段甲,片段甲两端分别为M1M2;利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术将片段甲插入B1的基因组,得到菌株B2。酶切位点(I~Ⅳ)、引物(P1P4)的结合位置、片段甲替换区如图所示,表示引物5'→3'方向。回答下列问题。

1)限制酶切割的化学键是________。为保证N基因能在菌株B2中表达,在构建片段甲时,应将M1M2片段分别插入质粒的Ⅰ和Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ酶切位点之间,原因是________

2CRISPR/Cas9技术可以切割细菌B1基因组中与向导RNA结合的DNA。向导RNAB1基因组DNA互补配对可以形成的碱基对有GC________

3)用引物P1P2进行PCR可验证片段甲插入了细菌B1基因组,所用的模板是________;若用该模板与引物P3P4进行PCR,实验结果是________

4)与秸秆焚烧相比,利用高效降解纤维素的细菌处理秸秆的优点是________(答出2点即可)。

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某研究小组将纤维素酶基因(N)插入某种细菌(B1)的基因组中