图1表示某细菌的质粒中相关限制酶的切割位点,图2表示目的基因所在的DNA中相关限制酶的切割位点。请分析并回答下列问题:
(1)用SmaⅠ限制酶处理图1所示的一个质粒会得到种DNA片段,会增加个游离的磷酸基团。
(2)在实际操作中,最好选用 (填限制酶名称)同时切割质粒和含目的基因的外源DNA,其优点是能避免目的基因和质粒在酶切后产生的片段发生自身环化或任意连接,以及便于筛选需要。一个目的基因通过PCR技术扩增第n次,需要个引物。
(3)为了筛选获得含有重组质粒的大肠杆菌,实验人员首先将经转化处理过的大肠杆菌接种在含 (抗生素)的培养基甲中,然后用影印法将该培养基上的菌落按原来的方向印在含 (抗生素)培养基乙上,以筛选获得含重组质粒的细菌。含重组质粒的大肠杆菌在两种培养基的生长情况是。
经检测:在上述导入了重组质粒的大肠杆菌菌株中,目的基因正常转录形成了mRNA,但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性,最可能的原因是。