为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。
（1）获得耐盐基因后，可通过 扩增目的基因。构建重组DNA分子所用的限制性核酸内切酶作用于图中的 处，DNA连接酶作用于 处。（填“a”或“b”）
（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞常用的方法有 法和 法。
（3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。
（4）若将该转基因植株的花药在高盐碱的培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中耐盐型植株大约占___________%。
（5）利用基因工程技术培育耐盐水稻新品系，相比传统的杂交育种方法，其优点主要表现为_________。
请回答下列有关基因工程的问题：
（1）如果用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种__________片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体就叫做这种生物的__________。
（2）一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有______，______以及__________。
（3）目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为__________。将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是__________法。
（4）目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。首先，要检测转基因生物__________上是否插入了目的基因。其次，还需要检测目的基因是否__________。最后检测目的基因是否__________。
【生物—选修3：现代生物科技专题】（15 分）阅读下面关于“利用转基因番茄生产人胰岛素的方法”的专利摘要，请回答：
本发明利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素。所用的人胰岛素基因是根据植物“偏爱”的密码子设计，通过人工合成若干DNA 片段，拼接而成。将该基因置于CaMV 35S 启动子和果实专一性启动子2A12 的驱动之下通过农杆菌介导的方法转入番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素。并且在胰岛素-COOH端加上KDEL 内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解。
（1）根据上述专利摘要，本发明中所用的人胰岛素基因是采用__________的方法获得，获得的目的基因与人体细胞中胰岛素基因的碱基序列_____。（填“相同”或“不同”）
（2）本发明中，转基因操作时所用的载体是__________，载体上的T-DNA可以转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA 上。构建的基因表达载体中应含有下列哪些结构__________。（多选，填编号）
①终止密码子 ②内含子滞留序列 ③CaMV 35S 启动子 ④果实专一性启动子2A12 ⑤标记基因 ⑥终止子 ⑦引物 ⑧复制原点 ⑨内质网滞留序列 ⑩目的基因
（3）通过农杆菌介导的方法将人胰岛素基因转入番茄中的具体操作是：用含有基因表达载体的农杆菌感染番茄植株的损伤部位，伤口处的番茄植株细胞会分泌大量的__________，吸引农杆菌移向这些细胞。通过农杆菌的________作用，就可以使目的基因进入番茄植株细胞，并将其插入到番茄植株细胞中染色体的DNA上。
（4）请从人体相关生理分析，吃这种转基因番茄能否治疗人类的Ⅰ型糖尿病？________（填“能”或“不能”）。原因是：___________。
拟南芥某突变体可用于验证相关基因的功能。野生型拟南芥的种皮为深褐色（TT），某突变体的种皮为黄色（tt）。下图是利用该突变体验证油菜种皮颜色基因（Tn）功能的流程示意图。请据图回答下列问题：
（1）图中①为 ，形成过程中需要 酶；Tn基因能够和质粒连接成①的主要原因是 。
（2）拟南芥t基因的mRNA的末端序列为“－AGCGCGACCUGACUCUAA－”，而油菜Tn基因的mRNA与其相比，只有末端序列中的UGA变为AGA，则Tn比ｔ多编码 个氨基酸（起始密码子位置相同，UGA、UAA为终止密码子）。油菜Tn基因能在油菜突变体中表达的原因是 。
（3）若②不能在含抗生素Ｋan的培养基上生长，则原因是 。若转基因拟南芥的种皮颜色为 ，则说明油菜Tn基因与拟南芥T基因的功能可能相同。
（4）采用PCR技术扩增目的基因时，需在PCR反应体系加入引物等物质，若共用了引物30个，则目的基因扩增了 代。
下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。
（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是 （填字母代号）。
A．启动子 B．tetR C．复制原点 D．ampR
（3）过程①可采用的操作方法是 （填字母代号）。
A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化
C．显微注射 D．细胞融合
（4）过程②采用的生物技术是 。
（5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的 性。
（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用 （填字母代号）技术。
A．核酸分子杂交 B．基因序列分析
C．抗原—抗体杂交 D．PCR
【选修3：现代生物科技专题】动物乳腺生物反应器是一项利用转基因动物的乳腺代替传统的生物发酵，进行大规模生产可供治疗人类疾病或用于保健的活性蛋白质的现代生物技术。目前科学家已在牛和羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素等重要药品。大致过程如图所示：
（1）在过程③中需要用到的工具酶有__________________。要使人的药用蛋白基因在奶牛乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、_________________、标记基因等部分。
（2）要实现超数排卵，应在性成熟雌牛发情周期的某一阶段用____________处理。通过①采集的精子不能直接使成熟的卵子受精，原因是____________。
（3）将获得的重组细胞培养成早期胚胎后，移植到经过____________处理的受体母牛子宫内。因为我们对细胞所需的营养条件还没有完全搞清楚，所以，在早期胚胎的培养基中，往往还需要添加____________。
（4）若要一次获得多只完全相同的转基因牛，应采用胚胎分割移植技术。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意将____________均等分割。胚胎分割移植后发育成小牛，这些小牛的基因型____________（填“相同”或“不同”）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
(1)cDNA文库属于 基因文库，其构建方法是：用某种生物发育的某个时期的____通过反转录产生cDNA片段，与 连接后储存在一个受体菌群中。
(2)切割DNA分子的工具是____ ，它能使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开，形成黏性末端或平末端。
(3)基因工程中所使用的DNA连接酶有两类。既可以“缝合”黏性末端，叉可以“缝合”平末端的是 DNA连接酶。
(4)将目的基因导人植物细胞采用最多的方法是___ _；如果受体细胞是大肠杆菌，需要用 处理细胞，使之成为感受态细胞，才能吸收DNA分子。
栽培的玉米品种抗旱、抗倒伏能力差。假设A、b代表玉米的抗旱、抗倒伏优良基因，这两种基因是自由组合的。现有AABB、aabb两个品种，为培育优良品种AAbb，可采用的方法如右图所示。请回答相关问题：
（1）经过①、②、③过程培育出新品种的育种方法称之为 。
（2）方法④还能够从其他物种获取目的基因转入玉米，该方法的优点是 。
（3）⑦过程育种方法为 。
（4）⑥过程在实验室最常用试剂的作用机理是 。
（5）①、⑤、⑥过程育种方法的优点是 。
科学家将人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。但在
进行基因工程的操作过程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制
酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—，请据图回答：
（1）过程①所需要的酶是________。
（2）在构建基因表达载体的过程中，应用限制酶______切割质粒，用限制酶______切割目的基因。用
限制酶切割目的基因和载体后形成的黏性末端通过__________________原则进行连接。人的基因
之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是__________________。
（3）在过程③中一般将受体大肠杆菌用________________进行处理，以增大_______的通透性，使含有
目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。
（4）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，得到如图a所示的结果（圆点表示菌
落），该结果说明能够生长的大肠杆菌中已导入了____________________，反之则没有导入；再将
灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得
到如图b所示的结果（圆圈表示与图a中培养基上对照无菌落的位置）。与图b圆圈相对应的图a
中的菌落表现型是__________________________，这些大肠杆菌中导入了________________。
（5）人体的生长激素基因能在大肠杆菌体内成功表达是因为______________________。
目的基因导入大肠杆菌中后表达的过程是______________________________________。
【生物—选修3：现代生物科技专题】治疗性克隆是指把患者体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中，构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞（如神经细胞、肌肉细胞和血细胞），用于治疗。请回答下列问题：
（1）ES细胞是胚胎干细胞的简称，在形态上，表现为 ：在功能上，具有发育的全能性。将重组胚胎在体外培养到____ 时期，从该时期的___ _中进行分离，从而获得ES细胞。
（2）在培养液中加入 可诱导ES细胞定向分化成所需的各种特定类型细胞或器官，该过程研究的意义在于解决____问题。
（3）科学家将患者的体细胞核植入去核的卵母细胞中，而不是直接用体细胞进行细胞培养的原因是 。
（4）科学家将体外培养的ES细胞进行诱导使其定向分化为胰岛B细胞，并进行了胰岛素释放实验：控制培养液中___ _的浓度，检测细胞分泌的胰岛素的量，如图为实验结果，据此分析确认ES细胞诱导成功，得到此结论的依据是________。
目前，精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。请据图回答：
（1）获取外源基因用到的工具酶是 ，为了提高实验成功率，通常利用 技术获得大量标记的外源基因。
（2）外源基因能够整合到精子的 上是提高转化率的关键，因为受精时只有精子的 才能进入卵细胞中。
（3）过程②采用的是 技术，该过程中应对已经导入外源基因的精子进行 处理。
（4）过程③需要在 (请写出4点)等条件下进行。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入 。
干扰素是病毒侵入人体后由淋巴细胞产生的一种免疫活性物质，它具有广谱抗病毒的作用。利用现代生物技术生产干扰素的流程如下：
(1)过程①产生的物质A是_____ _，cDNA文库___ ___(大于/小于)人的基因组文库。
(2)过程④用到的工具酶是 、 ，过程⑤需先用_________处理受体细胞，过程⑥通常采用________技术。
(3)过程⑧和⑨涉及的关键技术分别是________、________。
(4)基因工程的核心步骤是图中的______________(填标号) 。
近日，中国女科学家屠呦呦获2015年诺贝尔生理医学奖，她研制的抗疟药—青蒿素挽救了数百万人的生命。但是自然界青蒿中青蒿素的含量很低，且受地域性种植影响大。通过研究已经弄清了青蒿细胞中青蒿素的合成途径（如下图实线方框内所示），并且发现酵母细胞也能够产生青蒿素合成所需的中间产物FPP（如下图虚线方框内所示）。请回答以下问题：
（1）根据图示代谢过程，科学家在设计培育能生产青蒿素的酵母菌细胞过程中，需要向酵母细胞中导入________、_________等基因。导入相关基因前，一般先用_______处理酵母细胞，使之由常态变为感受态。
（2）在FPP合成酶基因表达过程中，①是__________过程，需要___________酶催化，此酶在基因上结合的特定部位是_______。检测过程②是否成功一般可采用___________方法。
（3）实验发现，酵母细胞导入相关基因后，这些基因能正常表达，但酵母菌合成的青蒿素仍然很少，根据图解分析原因很可能是____________。
［生物——选修3：现代生物科技专题］根据所学知识回答问题：
（1）基因工程中基因表达载体除包括目的基因外，还必须有__________及标记基因等。
（2）若要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的____________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的___________中。植物组织培养的主要原理是植物细胞具有____________，具体过程是在____________和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过____________产生愈伤组织，最终形成完整的植株。
（3）在哺乳动物的核移植实验中，通过一定的措施将受体细胞激活，使其进行细胞分裂和发育，当胚胎发育到____________阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内。
（4）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项）______。
玉米（2N=20）是重要的粮食作物之一。已知玉米的高秆易倒伏（D）对矮秆抗倒伏（d）为显性,抗病（R）对易感病（r）为显性,控制上述两对性状的基因分别位于两对同源染色体上。为获得纯合矮秆抗病玉米植株,研究人员采用了下图所示的方法。根据材料分析回答问题。
（1）获得此纯合矮杆抗病植株涉及的育种方式有 。
（2）过程③的育种过程依据的主要原理是 ，在构建抗病基因表达载体时，必须使用 和 两种工具酶；
（3）若过程①的F1自交1代,产生的矮杆抗病植株中纯合体占 。
（4）过程②,若单倍体幼苗通过加倍后获得M株玉米,通过筛选得到的矮秆抗病植株的基因型为 ,在理论上有 株。
（5）盐碱地是一种有开发价值的土地资源,为了开发利用盐碱地,从而扩大耕地面积,增加粮食产量,我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐玉米新品系。为了确定耐盐转基因玉米是否培育成功,要用 的方法从个体水平鉴定玉米植株的耐盐性。
试题篮
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