图示方案为人们获得生物新品种的过程，请回答下列问题：
（1）基因工程的核心步骤是 。方案Ⅰ中，将抗冻蛋白基因导入烟草受体细胞常用的方法是 。从分子水平检测抗冻烟草是否培育成功的方法是： 。
（2）推测方案Ⅱ中A基因所起的作用是 。
（3）方案Ⅲ中的转基因牛可以通过分泌乳汁来生产人的生长激素。人的生长激素基因在导入受体细胞前，基因的首段必须含有使其仅能在山羊 细胞中特异性表达的 。
（4）方案Ⅲ中的早期胚胎在移植入受体母羊子宫之前，必须对胚胎进行性别鉴定，一般是取处于 时期的 细胞进行检测。
某研究小组欲将已知抗除草剂基因导人原生质体培育抗除草剂大豆。请回答下列问题：
（1）为获得大量抗除草剂基因，可通过_______技术进行扩增，也可将其连接到_______上，通过大肠杆菌培养扩增。
（2）制备叶片原生质体的酶混合液中，一般含较高浓度的甘露醇，其目的是避免制备的原生质体_________。酶混合液需通过_________灭菌，才能用于无菌原生质体的制备，整个无菌操作过程需在_________中进行。
（3）可通过___________方法，直接将抗除草剂基因导入原生质体的细胞核。此外，还可用聚乙二醇融合、电击等方法导入。导入后的原生质体需再生出__________，经持续分裂获得愈伤组织，进一步分化获得再生植株并扩大繁殖。
（4）利用带有标记的抗除草剂基因特殊片段与从转基因植株提取的RNA进行___________，验证抗除草剂基因是否被整合到受体的细胞中并转录。
研究发现，人体2号染色体上的ALK基因和EML4基因会发生异常融合（如下图所示），该变异与肺癌的发生关系密切，为探究A-E融合基因的作用，研究者以小鼠为材料进行了多项实验，请回答：
（1）将A-E融合基因的表达载体导入小鼠的 细胞，如果转基因成功可在小鼠体内检测到 、 和 。
（2）A-E融合基因在转基因小鼠的肺泡上皮细胞表达。几周后发现这些小鼠的双肺长出了成百上千的癌结节，说明该融合基因表达产物有致癌作用，为使该结论更有说服力，还需用 的小鼠进行对照实验。该产物致癌的机理可能是什么？ 。
（3）ALK抑制剂是治疗该种肺癌的特效药物，但是A-E融合基因的表达产物在1156号（半胱氨酸→甲流氨酸）和1196号（亮氨酸→甲流氨酸）发生改变时，该药物失效，说明该融合基因发生了由于 而引起的突变。目前发现A-E融合基因还可以发生9种以上的突变，这些突变都能导致肺部癌变，也使特效药失效，以上现象体现了基因突变的 （至少回答两点）特点。
下列不属于基因工程的是（ ）
| A．培养出抗烟草花叶病的番茄植株 |
| B．在大肠杆菌中获取人的干扰素 |
| C．培养出兼有鲤鱼与鲫鱼特点的鲤鲫移核鱼 |
| D．利用“工程菌”生产乙肝疫苗 |
根据所学知识回答问题：
（1）基因工程中基因表达载体除包括目的基因外，还必须有 及标记基因等。
（2）若要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的 中。植物组织培养的主要原理是植物细胞具有 ，具体过程是在 和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过 产生愈伤组织，最终形成完整的植株。
（3）在哺乳动物的核移植实验中，通过一定的措施将受体细胞激活，使其进行细胞分裂和发育，当胚胎发育到 阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内。
（4）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项） 。
【生物----选修3：现代生物科技专题】
抗凝血酶Ⅲ蛋白是一种血浆糖蛋白，临床上主要用于血液性疾病的治疗。下图为培育转基因奶牛获得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。回答问题：
（1）过程①是 ，该过程常用的方法是 。
扩增抗凝血酶 Ⅲ蛋白基因经常采用 技术。
（2）过程②包括 技术和 技术；可用 技术获得多只与该转基因奶牛遗传物质相同的牛犊。
（3）若要检测牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白，可采用 技术。
（4）如果检测发现抗凝血酶Ⅲ蛋白基因被导入了受精卵，但却没有检测到抗凝血酶Ⅲ蛋白的存在，那应该考虑分别位于目的基因首端和末端的 没有设计好，应从这方面考虑改善。
现代人们对生物工程技术发挥的作用褒贬不一，但生物工程在为人们提供需要的生物新品种或新产品方面确实发挥了重要作用。请回答下列问题：
（1）转人生长激素基因牛发生的可遗传变异是__________，③过程用到的生物技术手段有____________。如欲得到基因型相同的两头牛犊，可在__________________阶段，采用____________技术达到此目的，两头牛的性别_________（填“相同”或“不同”）。
（2）将无限增殖调控基因（prG）导入浆细胞制备单克隆抗体的过程中，应进行多次_____检测，Ⅲ代表的细胞具有_______的特点，具有此类功能的细胞还可以通过_______（技术）方法获得。
（3）在抗虫棉培育过程中，将棉花细胞培养成抗虫棉植株所依据的原理是____________，④过程常用的方法是___________法。若要获得该种抗虫棉的无病毒植株，应选用其__________处的组织进行培养。
野生型大肠杆菌（E．coli）具有完整的LacZ基因，该基因编码的β-半乳糖苷酶由α片段和ω片段两部分组成，两部分均存在时可将无色化合物X-gal切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝，从而使整个菌落变为蓝色。DH5α是基因工程中常用的一种大肠杆菌诱变菌株，对氨苄青霉素敏感，其LacZ基因中编码ω片段的序列仍然保留，但编码α片段的序列缺失。
（1）根据中心法则，LacZ基因控制β-半乳糖苷酶合成的过程主要包括_____和______两个环节。
（2）某研究小组构建了质粒pXY-1，如图甲所示，该质粒含氨苄青霉素抗性基因Ampr和编码大肠杆菌β-半
乳糖苷酶α片段的基因片段LacZ’。图乙显示的则是Nae I、Hpa II和Kas I三种限制性内切酶的识别序
列（
表示切割位点）。
若以该质粒作为运载体，将外源目的基因（图丙）导入大肠杆菌DH5α菌株，在构建重组质粒时应选用的限制性内切酶是______。此外，还需用到的另一种酶是______。
（3）若用涂布有氨苄青霉素和X-gal的固体培养基筛选上一题中含目的基因的受体菌，下列说法中正确的
有______。（多选）
| A．没有导入任何质粒的DH5α细菌可以在该培养基上生长且菌落为白色 |
| B．导入了pXY-1空载体质粒的DH5α细菌可以在该培养基上生长且菌落为蓝色 |
| C．导入了pXY-1重组质粒的DH5α细菌可以在该培养基上生长且菌落为白色 |
| D．导入了pXY-1重组质粒的DH5α细菌可以在该培养基上生长且菌落为蓝色 |
（4）．现从上一题的固体培养基平板上挑取一个重组菌落，经扩大培养后提取质粒，分别用不同的限制性内
切酶处理并对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果如表所示：
| 所用限制性内切酶 |
所得条带长度 |
| BamH I、Sca I双酶切 |
1230bp、2770bp |
| Hpa II、Sca I双酶切 |
460bp、1240bp、xbp |
分别用不同的限制性内
切酶处理并对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果如表所示：据此可知，目的基因全长为______bp，在其内部存在______（填限制酶名称）的切割位点，表中字母x代表的数值应为______。
【生物—选修3：现代生物科技专题】
青蒿素是治疗疟疾的重要药物。研究人员已经弄清了青蒿细胞中青蒿素的合成途径（如图中实线方框内所示），并且发现酵母细胞也能够产生合成青蒿素的中间产物FPP（如图中虚线方框内所示）。结合所学知识回答下列问题：
（1）疟疾俗称“打摆子”，是由疟原虫引起的寒热往来症状的疾病。当疟原虫寄生在人体中时，会引起人的免疫反应，使 细胞产生淋巴因子。同时B细胞在受到刺激后，在淋巴因子的作用下增殖分化成 细胞，产生抗体。
（2）根据图示代谢过程，科学家在培育能产生青蒿素的酵母细胞过程中，要向 中导入的基因是 ，具体操作中可利用 技术检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因。
（3）构建基因表达载体时，用不同类型的 切割DNA后，可能产生 末端，也可能产生 末端。
（4）实验发现，酵母细胞导入相关基因后，该基因能正常表达，但酵母菌合成的青蒿素仍很少，根据图解分析原因可能是 。
【生物—选修3：现代生物科技专题】治疗性克隆是指把患者体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞中，构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞（如神经细胞、肌肉细胞和血细胞），用于治疗。请回答下列问题：
（1）ES细胞是胚胎干细胞的简称，在形态上，表现为 ：在功能上，具有发育的全能性。将重组胚胎在体外培养到____ 时期，从该时期的___ _中进行分离，从而获得ES细胞。
（2）在培养液中加入 可诱导ES细胞定向分化成所需的各种特定类型细胞或器官，该过程研究的意义在于解决____问题。
（3）科学家将患者的体细胞核植入去核的卵母细胞中，而不是直接用体细胞进行细胞培养的原因是 。
（4）科学家将体外培养的ES细胞进行诱导使其定向分化为胰岛B细胞，并进行了胰岛素释放实验：控制培养液中___ _的浓度，检测细胞分泌的胰岛素的量，如图为实验结果，据此分析确认ES细胞诱导成功，得到此结论的依据是________。
转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原的基因，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示（①至④代表过程，A至C代表结构或细胞）：
（1）图中①过程用到的酶是 ，所形成的B叫做 ，B是由 、 、 和 等部分组成。
（2）②过程常用 处理农杆菌，使之成为 细胞，利于完成转化过程。
将目的基因导入受体细胞的方法很多，在该题中涉及到的方法是 。
（3）在分子水平上，可采用 的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原。
目前，精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。请据图回答：
（1）获取外源基因用到的工具酶是 ，为了提高实验成功率，通常利用 技术获得大量标记的外源基因。
（2）外源基因能够整合到精子的 上是提高转化率的关键，因为受精时只有精子的 才能进入卵细胞中。
（3）过程②采用的是 技术，该过程中应对已经导入外源基因的精子进行 处理。
（4）过程③需要在 (请写出4点)等条件下进行。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入 。
根据所学知识回答问题：
（1）基因工程中基因表达载体除包括目的基因外，还必须有__________及标记基因等。
（2）若要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的_________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的___________中。植物组织培养的主要原理是植物细胞具有____________，具体过程是在____________和人工控制条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其经过____________产生愈伤组织，最终形成完整的植株。
（3）在哺乳动物的核移植实验中，通过一定的措施将受体细胞激活，使其进行细胞分裂和发育，当胚胎发育到____________阶段时，将胚胎移入受体（代孕）动物体内。
（4）生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理（至少答两项） 。
下图是科学家利用供体生物DNA中的无限增殖调控基因，制备单克隆抗体的过程。下列相关叙述错误的是
| A．经限制酶处理后的目的基因与载体的黏性末端相同 |
| B．Ⅰ是经特定抗原免疫过的B淋巴细胞 |
| C．此种制备单克隆抗体的方法涉及转基因及动物细胞融合技术 |
| D．经检测和筛选后的Ⅱ，既能无限增殖又可分泌单克隆抗体 |
试题篮
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