日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白(GFP)等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
(1)绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为________基因。图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因和质粒。限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成的黏性末端：______________。
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是______________________________________________________________。
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_________________________________________。
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是(用数字表示)________________。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白
人类在预防与诊疗传染性疾病的过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如下图，请回答：
(1)过程①代表的是______________。
(2)过程②构建A基因表达载体时，必须使用__________和__________两种工具酶。
(3)过程③采用的实验技术是____________，获得的X是____________。
(4)对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的__________所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行________比较；或用图中的____________________进行特异性结合检测。
某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。
(1)将抗盐基因导入烟草细胞内，使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来源属于____ ____。
(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞，一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能___ _____，也不能______ __。
(3)在构建重组质粒时，应选用____ ____和____ ____两种酶对__ ______和__ __ 进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
(4)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用____ ____技术，经过____ 和 ____进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加______ 。
(5)为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_____ ___作探针进行分子杂交检测，又要用____ ____的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。
科学家培育荧光鼠的设计思路可用下面的图解表示。据图回答下列问题(10分)
(1)科学家在过程A中对天然质粒做的修饰改造是________。B过程用到的工具酶有______________。
(2)E过程为体外受精，卵子的状态应达到________期才能与获能后的精子完成受精。G过程应用的技术称为________，此时的胚胎应发育到 时期。
(3)检测荧光小鼠细胞内是否含有基因X，常用的技术手段是______________________；判断转基因荧光鼠荧光基因的表达是否成功，在个体水平上应检测__________________________________。
(4)如果想一次繁殖多只转基因鼠，则需要在过程G中实施____________，胚胎移植时应选择 的受体。
下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。
（1）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？ ，为什么？ 。
（2）③④⑤过程是 技术，通过该过程可在体外获得大量目的基因，需要用到 酶。若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则③④⑤过程连续进行4次，至少需要提供胸腺嘧
啶 个。
（3）图中B是 ，在利用AB获得C的过程是基因工程的核心，一般的方法是用 切割A和B，使它们产生 ，再加入 ，才可形成C。最终形成的C应该含有的基本元件是 等。
（4）为使过程⑧更易进行，可用 （药剂）处理D。由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率低，所以在转化后通常需要进行 操作。
下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。
(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是 (填字母代号)。
A.启动子 B.tetR C.复制原点 D.ampR
(3)过程①可采用的操作方法是 (填字母代号)。
A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化 C．显微注射 D．细胞融合
(4)过程②采用的生物技术是 。
(5)对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的 性。
(6)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用 (填字母代号)技术。
A．核酸分子杂交 B．基因序列分析 C．抗原-抗体杂交 D．PCR
阅读如下资料：
资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”。
资料乙：科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。
回答下列问题：
（1）资料甲属于基因工程的范畴。构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。
（2）构建的表达载体含有牛生长激素基因及其启动子等，其中启动子的作用是___________。将基因表达载体导入小鼠受精卵内常用 法。
（3）资料乙属于基因工程和细胞工程的范畴。鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与________融合，形成____________细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点在于_____________，可大量制备。
（4）与植物原生质体的融合相比，动物细胞融合在诱导融合方法方面的主要区别是还常用__________诱导融合。
干扰素是动物体内合成的一种蛋白质，可以用于治疗病毒感染和癌症，但体外保存相当困难，如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，就可在－70℃条件下保存半年，给广大患者带来福音。
(1)蛋白质的合成是受基因控制的，因此获得能够控制合成“可以保存的干扰素”的基因是生产的关键，依据蛋白质工程原理，设计实验流程，让动物生产“可以保存的干扰素”：
(2)基因工程和蛋白质工程相比较，基因工程在原则上只能生产 的蛋白质，不一定符合 需要。而蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过 或 ，对现有蛋白质进行 ，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活需要。
(3)蛋白质工程实施的难度很大，原因是蛋白质具有十分复杂的 结构。
(4)对天然蛋白质进行改造，应该直接对蛋白质分子进行操作，还是通过对基因的操作来实现？原因是什么？
我国基因工程药物的研制和生产发展迅猛，下图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图。
根据上图回答下列问题（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：
（1）过程②必需的酶是__________________酶，过程④必需的酶是_________________酶。⑤为提高成功率，常用 溶液处理大肠杆菌细胞。
（2）为了使目的基因和质粒B定向连接并且有利于受体细胞的筛选，酶1是 。
（3）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒A进行切割，用一种酶、两种酶和三种酶分别切割时，则形成的DNA片段共 种，含有完整四环素抗性基因的DNA片段的概率是_______。
（4）作为受体的大肠杆菌细胞内，应不含__________基因，以利于筛选出含重组载体的受体菌。
（5）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程，为什么？ 。
浙江大学农学院喻景权教授的课题组最新研究发现一种植物激素——油菜素内酯，能促进农药在植物体内的降解和代谢。研究人员发现，用油菜素内酯处理后，许多参与农药降解的基因(如P450和GST)的表达和酶活性都得到提高，在这些基因的“指导”下合成的蛋白酶能把农药逐渐转化为水溶性物质或低毒无毒物质，有的则被直接排出体外。某课题组进一步进行了如下的实验操作，请回答：
(1)获得油菜素内酯基因的方法有____________________、________________。第①步用PCR技术扩增基因时用到的耐高温的酶通常是指______________。步骤②用到的酶有________________。
(2)图中导入重组质粒的方法是________。在导入之前应用____________处理。
(3)导入重组质粒以后，往往还需要进行检测和筛选，可用________________制成探针，检测是否导入了重组基因，在培养基中加入________可将含有目的基因的细胞筛选出来。
(4)请你为该课题命名：______________________________________________________。
(5)请你说说该研究发现的生态学意义。
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
随着基因工程技术的日臻完善，人类可利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素。所用的人胰岛素基因是依据植物“偏爱”的密码子来设计所含的密码子，通过人工合成若干DNA片段，拼接而成，并且在胰岛素-COOH端加上KDEL内质网滞留序列，避免胰岛素在植物细胞中的降解。将该基因置于果实专一性启动子的驱动之下通过农杆菌介导的方法转入番茄中，在番茄的果实中表达人胰岛素。据此回答下列问题
（1）上述基因工程操作是采用___________方法获得目的基因的。获得的人胰岛素基因与人体细胞中胰岛素基因中编码氨基酸的碱基序列不同，但两者所编码的蛋白质中氨基酸序列相同，这是因为_____________________________。要想在体外获得大量该目的基因的片段，可以采用____________技术。该技术中使用的关键酶是________________________ 。
（2）根据上述描述，转基因操作时所用的载体是_____________________，载体上的____________可以转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。构建的基因表达载体中应含有____________________（从下列选项中选择）。
①目的基因 ②内质网滞留序列 ③果实专一性启动子 ④引物
⑤标记基因 ⑥终止子 ⑦终止密码子 ⑧起始密码
（3）如果要检测在受体细胞中是否存在目的基因可采用___________________技术。该技术中使用的基因探针也可以用来检测________________________ 。
下图表示应用现代生物技术制备甲型H1N5病毒抗体的设想，请回答下列问题：
（1）在培育转甲型H1N5病毒抗体基因奶牛的过程中，①过程属于基因工程中 的构建，这要求甲型H1N5病毒抗体基因的首端必须含有 。
（2）转甲型H1N5病毒抗体基因奶牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N5病毒抗体，③过程需将受精卵培养到 时期再植入母体。可以采用 技术，培养出多头相同的转基因奶牛。
（3）prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是 细胞，筛选出的Ⅱ细胞才既能 又能产生特定抗体。
（4）制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术，与动物细胞融合过程不同，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用 对细胞进行处理，以除去细胞壁；常用的促融剂是 。
下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度。请据图回答：
（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是 、 。
（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到 酶。如果是两两重组，可能有 种长度的重组结果。
（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用 酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和 kb，或者 kb和 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。
加拿大科学家通过转基因技术培育出转基因山羊，其乳汁中可产生大量人类丁酰胆碱酯酶，这种酶是对付神经毒气弹的强力解毒药。下图是转基因山羊的培育过程示意图，请据图回答问题（山羊为二倍体）：
（1）在上述操作中，目的基因是 基因，为了使该基因只在乳腺细胞表达，应将该基因与_____________________基因的启动子等调控组件重组在一起，通过__________________法，将该基因导入受精卵中。
（2）胚胎工程是指对动物的早期胚胎或 所进行的多种显微操作和处理技术。图中过程⑦所涉及的胚胎工程技术是 。
（3）从雌性山羊卵巢内获取的卵母细胞需要培养到 期才能完成受精作用，此时细胞中的染色体组数是 。过程是精子的采集和获能，根据实验目的，应用精子分离技术选择_____________精子。受精过程中防止多精入卵的两道屏障是透明带反应和 。
（4）假设生产出来的丁酰胆碱酯酶的某些方面还不符合要求，还需要通过基因修饰进行改造，这一技术称为 。
（5）下列不属于生物武器特点的是 （单选）。
| A．致病力强，传染性大 | B．污染面积大，危害时间长 |
| C．有潜伏期，传染途径多 | D．造价高，技术难度大 |
人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示（注:基因B为高血压相关基因）。
(1)进行①过程之前，需对人工采集的精子进行获能处理。获能的方法有培养法和
法。①过程中精子入卵后，卵细胞膜会立即发生___________,这是防止多精入卵的第二道屏障。
(2)高血成相关基因B在导入②之前需要 ，这是基因工程的核心。为保证基因B正确表达，应将其插入在_____和之间。其中标记基因的作用是为了鉴别_________。
(3)④过程中，为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的_____。并且一般需将细胞置于含95%的空气加______的混合气体的培养箱中进行培养。
(4)圈示中甲细胞是 。其在核移植⑤之前需要进行去核处理，同时用微型吸管吸走________。
试题篮
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