下图是将目的基因导入动物细胞，培育转基因动物的常用操作程序。根据图示过程和所学知识，将下面操作程序补充完整。
（1）构建基因表达载体：在构建基因表达载体时常要用到工具酶。常用的DNA连接酶有__________和___________，后者也可以用于平末端的连接。如果目的基因要在乳腺细胞中表达，基因表达载体构建时要将目的基因与__________、标记基因和终止子等组件重组在一起，载体一般要有一至多个限制酶切割位点便于 _________。
（2）获得足够数量的受精卵：为了获得足够数量的受精卵，先利用___________刺激供体雌性鼠超数排卵，然后从______________冲取______________，再完成体外受精。
（3）将目的基因导入细胞：确定目的基因是否整合到染色体上，一般需用______________做探针，与转基因小鼠细胞中提取的______________进行DNA分子杂交。
（4）早期胚胎培养：早期胚胎培养的培养液成分一般比较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加___________、______________，氨基酸、核苷酸等营养成分，以及动物血清等物质。当胚胎培养到适宜的阶段时，可进行胚胎移植。
（5）胚胎移植：在胚胎移植前要对接受胚胎的受体进行_____________处理。移植后，还要对受体雌鼠进行_____________检查。
（6）胚胎干细胞形态上具有__________________________________________的特性，它在添加______________的培养液中可以维持不分化的状态。
下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含________的培养基上培养，然后再在含________的培养基上进行。
(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________(填字母代号)。
A．启动子 B．tetR
C．复制原点 D．ampR
(3)过程①可采用的操作方法是________(填字母代号)。
A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化
C．显微注射 D．细胞融合
(4)对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的________性。
(5)为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用________(填字母代号)技术。
A．核酸分子杂交 B．基因序列分析
C．抗原—抗体杂交 D．PCR
下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列有关问题：
(1)若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶________切割质粒，用限制酶________切割抗虫基因。①过程在________(体内/体外)进行。
(2)将通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有________的培养基上，能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入，该培养基从功能方面属于________培养基。
(3)重组质粒导入大肠杆菌的目的是________。
(4)⑤过程所用技术称为________，从遗传学角度来看，根本原因是根细胞具有________。
科学家培育荧光鼠的设计思路可用下面的图解表示。
依据设计程序，回答下列问题：
（1）科学家在过程A中对天然质粒做的修饰改造是________ 。
（2）检测荧光小鼠细胞内是否含有基因X，在分子水平上通常用________________作探针；判断转基因荧光鼠荧光基因的表达是否成功，在个体水平上应检测_________ 。
（3）基因工程的操作步骤中其中核心的步骤是________ （填字母） 。
（4）质粒上的启动子和起始密码子的区别是_________ _________ 。
（5）图中萤光水母cDNA文库属于_________ 文库，cDNA文库比较小，不含_________
和非编码区，________（能/不能）在不同种的生物间进行基因交流。
【生物—选修3 现代生物科技专题】(15分)下图为桑基鱼塘的物质和能量交换模式图,据图回答,
(1)该生态工程体现了 等生态工程的基本原理〔选答两项〕｡
(2)通过现代生物技术可提高传统生态工程的效益,要通过基因工程培育抗病甘蔗,需要的工具酶是 ,可通过 技术将导入了目的基因的甘蔗细胞培养成植株｡若要检测目的基因是否表达相应的蛋白质则可以用 技术进行检测,其依据的原理是 ｡
(3)为大量繁殖良种猪,可采用胚胎移植技术｡该技术,首先要对母猪做超数排卵处理,以获得更多的良种猪卵母细胞,与经过 处理的良种猪精子进行体外受精｡将早期胚胎培养到 时期,再将胚胎移植到本地母猪体内发育成小猪｡受体对移入子宫的外来胚胎基本上不会发生 反应,为胚胎在受体内的存活提供了可能。
下图表示转基因动、植物的成功培育过程，有关叙述错误的是（ ）
A．目的基因导入受体细胞A前,受体细胞要用Ca2+处理,使其处于感受态
B．①过程用到的生物技术包括动物细胞培养、胚胎移植
C．过程②要用到植物组织培养技术
D．可通过标记基因对受体细胞A、B进行筛选
1979年，科学家将鼠体内的能够产生胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中发现了胰岛素的前体物质胰岛素原。如下图所示，请根据下图回答：
（1）图中2、5、3、7表示通过从供体细胞的DNA中直接分离基因，获得_________的过程。
（2）图中3代表____________，在它的作用下将目的基因和质粒切成黏性末端。
（3）经9__________的作用将7、6“缝合”形成8重组DNA分子。8往往含有________基因，以便将来检测。
（4）图中10表示将重组DNA分子导入_________的过程。
（5）如在大肠杆菌细胞内发现了胰岛素原，说明成功导入了___________，并使之完成了表达过程。
长期以来 ,香蕉生产遭受病害的严重威胁 ,制约了其发展。目前 ,随着转基因抗病香蕉基因工程技术的日趋成熟 ,为培育抗病香蕉品种开辟了新途径。转基因抗病香蕉的培育过程如图所示，质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答：
（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶 ，对 进行切割。
（2）培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有 ，作为标记基因。
（3）能使抗病基因在香蕉细胞中特异性表达的调控序列是： (填字母序号)。
| A．启动子 | B．终止子 | C．复制原点 | D．标记基因 |
（4）将目的基因导入植物细胞常用方法有多种，图中所示方法为 。
（5）欲检测目的基因是否表达成功，可采用的技术
（6）利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成转基因植株。香蕉组织培养的培养基中除了含有一定的营养物质外还必须含有 等植物激素，它们会在 （填图中标号）阶段发挥作用，同时 （填图中标号）阶段还需要给予一定光照。
（7）从香蕉组织块到获得转基因抗病香蕉试管苗的过程中，需经过 。(填数字)
①无丝分裂 ②有丝分裂 ③减数分裂 ④ 原代培养 ⑤ 传代培养
⑥ 植物体细胞杂交 ⑦ 细胞融合 ⑧ 脱分化 ⑨ 再分化
在基因工程中，限制酶主要用于
| A．目的基因的提取和导入 |
| B．目的基因的导入和检测 |
| C．目的基因与运载体结合和导入 |
| D．目的基因的提取和与运载体结合 |
请回答胚胎工程和基因工程方面的问题：
（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、＿＿＿＿、＿＿＿＿＿以及在母体中发育和产出等过程。
（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其＿＿。另外，培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和＿＿＿＿＿。
（3）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是＿＿
（4）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是＿＿、基因表达载体的构建、＿＿＿和＿＿＿。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、＿＿＿＿、＿＿＿＿、＿＿＿＿和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是＿＿＿＿＿（显微注射法、农杆菌转化法），为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是＿＿＿＿＿（受精卵、乳腺细胞）。
嗜热土壤芽胞杆菌产生的-葡萄糖苷酶（
）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
Ⅰ.利用大肠杆菌表达酶
⑴扩增
基因时，选用基因组
作模板。
⑵下图为质粒限制酶酶切图谱。基因不含图中限制酶识别序列。为使
扩增的
基因重组进该质粒，扩增的
基因两端需分别引入和不同限制酶的识别序列。
⑶大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为。
Ⅱ．温度对酶活性的影响
⑷据图1、2可知，80℃保温30分钟后，酶会；为高效利用
酶降解纤维素，反应温度最好控制在（单选）。
A．50℃ B．60℃ C．70℃ D．80℃
Ⅲ．利用分子育种技术提高酶的热稳定性
在扩增
基因的过程中，加入诱变剂可提高
基因的突变率，经过筛选，可获得能表达热稳定性高的
酶的基因。
⑸与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获取热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在过程中（多选）
A．仅针对基因进行诱变
B．基因产生了定向突变
C．基因可快速积累突变
D．基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变
人组织纤溶酶原激活物（）是一种重要的药用蛋白，可在转
基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
（1）基因与载体用切割后，通过
连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞
A，可采用技术。
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其。采集的精子需要经过，才具备受精能力。
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的。
（4）若在转基因母羊的羊乳中检测到，说明目的基因成功表达。
A．(生物技术实践，9分)生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物(秸秆)生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→-成品。
(1)纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化生产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下分离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤→取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。
①最好选择怎样的环境采集土样?
②以下是一种培养基配方：纤维素粉5g、NaN031g、Na2HP04。7H201.2g、KH2P040.9g、MgSO4·7H2O0.5g、KCl0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g(蒸馏水定容到1000ml)。该
培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是
③为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入 染液，
将筛选获得的茵液稀释后用 方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生透明圈的菌落作为菌种进行扩大培养。
④纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢?请设计实验进行检测。
(2)乙醇是酵母菌的发酵产物。发酵时酵母菌直接利用的物质是 。
(3)发酵时乙醇浓度升高会对酵母菌产生毒性，从而影响进一步的发酵。科学家利用基因工程方法创造出一种对乙醇浓度有高耐受力的酵母菌新菌种，该过程需采用PCR技术扩增目的基因。与体内DNA复制相比，PCR反应体系需加入哪两种特别的物质?
B．（现代生物科技，9分）下图是利用多种生物工程技术获得转基因牛的基本操作流程，请分析回答：
（1）在基因工程的操作程序中，基因工程的核心是 。
（2）在获取目的基因和构建目的基因表达载体的一个目的基因表达载体的组成包括标记基因和 。
（3）一般将受精卵作为目的基因的受体，将目的基因导入受精卵常用的方法C称 法。
（4）流程A和B分别指 和 。
（5）农场放牧要考虑环境承载力，牛粪可以用于沼气生产，它们分别应用了生态工程的_____和__________原理。
下图表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图右表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。
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回答下列关于基因工程的问题。
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种偶蹄动物传染病，目前常用接种弱毒疫苗的方法预防。疫苗的主要成分是该病毒的一种结构蛋白VPI。科学家尝试利用转基因番茄来生产口蹄疫疫苗，过程如下图1所示。图2表示目的基因与pZHZ1质粒构建重组质粒的过程，E、F、G、H分别为A、B、C、D四种不同限制酶的酶切位点。请据图回答。
1．如图1所示，口蹄疫病毒的遗传物质为RNA，则在过程①中，必须用到的酶是 ；在过程②中，必须用到的酶是 。
2．图2所示，若限制酶A、B切割出的末端完全不同，那么用这种双酶切的方法构建重组质粒的优点是 。
3．已知质粒pZHZ1的长度为3.7kb，（1kb=1000对碱基)其中EF区域长度为0.2kb，GE区域长度为0.8kb，FH区域长度为0.5kb。现分别用限制酶G、H切割重组质粒pZHZ2样品，结果被酶G切割成1.6kb和3.1kb两个片段，被酶H切割成1.2kb和3.5kb两个片段。据酶切结果判断VPI基因大小为 kb，并将目的基因内部的酶G、酶H切割位点用相应的字母标注在答案纸的对应位置 。
4．过程⑥的培养基中除了加入各种必需营养物质和 等激素外，还需要添加 筛选出含有重组质粒的叶片小段。
5．获得表达VPI蛋白的番茄植株以后，需要进行免疫效力的测定。具体方法是：将转基因番茄叶片提取液注射到豚鼠体内，每半个月注射一次，三次后检测豚鼠血液内产生的 的数量。
试题篮
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