拟南芥某突变体可用于验证相关基因的功能。野生型拟南芥的种皮为深褐色（TT），某突变体的种皮为黄色（tt）。下图是利用该突变体验证油菜种皮颜色基因(Tn)功能的流程示意图。请据图回答下列问题：
⑴图中①为 ，形成过程中需要 酶；Tn基因能够和质粒连接成①的主要原因是 。
⑵拟南芥t基因的mRNA的末端序列为“－AGCGCGACCUGACUCUAA－”，而油菜Tn基因的mRNA与其相比，只有末端序列中的UGA变为AGA，则Tn比ｔ多编码 个氨基酸（起始密码子位置相同，UGA、UAA为终止密码子）。油菜Tn基因能在油菜突变体中表达的原因是 。
⑶若②不能在含抗生素Ｋan的培养基上生长，则原因是 。若转基因拟南芥的种皮颜色为 ，则说明油菜Tn基因与拟南芥T基因的功能可能相同。
⑷采用PCR技术扩增目的基因时，需在PCR反应体系加入引物等物质，若共用了引物62个，则目的基因扩增了 代。
(9分)小立碗藓是一种苔藓植物，易培养，被广泛应用于生物学实验研究，又因其同源重组的效率很高，已成为研究基因功能的良好材料。请回答下列问题：
(1) 甲同学在使用高倍镜观察小立碗藓的叶绿体时，发现在适宜条件下细胞中的叶绿体长时间静止不动，最可能的原因是__________________________。
(2) 乙同学用小立碗藓进行了如下实验操作：
步骤一：在洁净的载玻片中央加一滴清水，放置一片小立碗藓的小叶，盖上盖玻片。
步骤二：从盖玻片一侧滴入0.3 g/mL的蔗糖溶液，在盖玻片的另一侧________，这样重复几次。
步骤三：在显微镜下观察，若发现叶绿体向细胞中间聚拢，说明____。
(3) 同源重组在细胞中可自然发生，交叉互换的位点必须发生在特定的同源序列中，原理如图1所示。已知由硫酸盐降解酶(K基因编码)催化某种硫酸盐(APS)的降解是高等植物中硫酸盐利用的关键步骤。有人提出，植物体中还存在着该硫酸盐降解的支路(PAPS)，但不能确定其相关酶是否在植物体中存在。科研人员利用小立碗藓进行了以下研究：
图1 
图2
① 测定K基因两侧的碱基序列。若测得在序列“5′…CGACCCGGGAGT…3′”中含有一个6个碱基对的限制酶SmaⅠ的识别序列，可推知该酶的识别序列为________。
② 质粒pcDNA3上有Neo基因(新霉素抗性基因)和限制酶Sma Ⅰ、Tth11 Ⅰ和Bsm Ⅰ的酶切位点，如图2所示。为了使Neo基因能与K基因发生同源重组，应选用限制酶________将Neo基因从质粒上切下来，然后在该基因的两侧增加与K基因两侧相同的________，构建具有Neo基因的表达载体。
③ 制备小立碗藓的原生质体，将其放在________溶液中，利用聚乙二醇介导直接将Neo基因表达载体导入小立碗藓细胞内。
④ 在添加了________的培养基中培养上述小立碗藓细胞，若能够发育成完整的植物体，则表明该植株已没有K基因。若通过此转化途径得到的植株________，说明在小立碗藓中存在PAPS支路。
【生物—选修3：现代生物科技专题】
我国科技人员历经多年，成功培育出一批人乳铁蛋白转基因奶牛，其牛奶中的重组人乳铁蛋白含量在国际上是最高的，转基因奶牛培育过程如图所示，据图回答下列问题。
（1）转基因过程用到的工具酶有 ；含目的基因的载体除包括目的基因外，还必须有
及标记基因等；方法C是 技术。
（2）精子体外获能通常采用培养法和 两种方法。
（3）图中的A和B分别表示 过程，A中的培养液除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、 等营养成分，以及血清等物质。
（4）如果想同时获得更多的相同子代，可采用 技术，若对囊胚操作，应注意 。
[生物一选修3:现代生物科技专题](15分)单克隆抗体的特点是特异性强、灵敏度高、可以大量制备，已被广泛应用于疾病的诊断和治疗。用H7N9病毒制备单克隆抗体的流程如下图所示:
(1)过程③常用的方法是 。
(2)向小鼠体内注射抗原蛋白，使小鼠产生 免疫。从小鼠体内分离的细胞I是 ，细胞Ⅱ应具有的特点是 。
(3)体外培养细胞II，首先应保证其处于 的环境，其次需要提供充足的营养和适宜的温度。培养箱充入二氧化碳的作用是 。
(4)对于转基因成功的细胞II还要进行克隆化培养和 检测。
(5)若要预防H7N9禽流感，可用图中的 作为疫苗。
下图所示为培育农作物新品种的过程示意图。请回答：
（1）图中①②分别表示一个已插入外源DNA片段的重组Ti质粒的________和________。
（2）若仅用二倍体植物甲的未成熟花粉培养完整植株，称为________植株，说明未成熟花粉具有________；这些植株只有通过________________才能结实。
（3）若要大量获取紫草素，可从 组织中提取。图示育种方法与传统杂交育种相比，主要优点是 。
(12分)基因工程自20世纪70年代兴起之后，在短短40年间得到了飞速发展，目前成为生物科学核心技术，在农牧业、工业、环境、能源和医药卫生等方面展示出美好的前景，据相关资料回答下列有关问题：
图1 图2
（1）图1是转基因抗冻番茄培育过程的部分示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，甲、乙表示相关结构或细胞。PstⅠ酶和Sma Ⅰ酶切割基因后将产生不同的黏性末端。图1中甲代表的是________________，乙可代表________，可用PstⅠ酶和SmaⅠ酶提取鱼的抗冻蛋白基因以避免目的基因末端发生任意连接。
（2）重症联合免疫缺陷病(简称SCID)是代表一种体液和细胞免疫严重缺陷的综合征。患者先天腺苷酸脱氨酶(ada)基因缺乏，运用现代生物技术进行治疗，可以使患者的免疫功能得到很大的修复。图2表示治疗SCID的过程，在这个实例中，携带人正常ada基因的细菌相当于________，充当“分子运输车”的是病毒，目的基因是________，受体细胞是 ，该种治疗方法称为________________。
(12分)【生物——现代生物科技专题】
阅读如下资料：
资料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”。
资料乙：科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。
回答下列问题：
（1）资料甲属于基因工程的范畴。构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。
（2）构建的表达载体含有牛生长激素基因及其启动子等，其中启动子的作用是________________________将基因表达载体导入小鼠受精卵内常用 法。
（3）资料乙属于基因工程和细胞工程的范畴。鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞， 在诱导剂的作用下与________融合，形成____________细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。 这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点在于__________________________，可大量制备。
（4）与植物原生质体的融合相比，动物细胞融合在诱导融合方法方面的主要区别是还常用__________诱导融合。
下图表示绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程。
（1）图中A—B过程中的核心步骤是________，B过程常用的方法是______。C过程需用_______处理猪胚胎的部分组织，以获得单个成纤维细胞进行培养。
（2）H过程能充分发挥______个体的繁殖潜力。图中的“早期胚胎”一般为______。
（3）在进行H过程之前，需要对代孕母猪进行_______处理，以便给供体胚胎移入受体提供______。图中涉及的现代生物工程技术中，属于分子水平的是_______。
【生物——选修3：现代生物科技专题】
应用现代生物技术可以大量获得针对甲型H1N1病毒的抗体，并可用于临床治疗，如图表示制备该抗体的设想，请据图回答下列问题：
(1)在培育转甲型H1N1病毒抗体基因牛的过程中，①过程需要的工具酶是____________，②过程常用的方法是____________。
(2)转甲型H1N1病毒抗体基因牛可通过分泌乳汁来生产甲型H1N1病毒抗体，在基因表达中，甲型H1N1病毒抗体基因的首端必须含有________，它是____________识别和结合的位点。③过程培养到桑椹胚或囊胚阶段，可以采用________技术，培养出多头相同的转基因牛。
(3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因可制备单克隆抗体，Ⅰ最可能是________细胞，Ⅱ代表的细胞具有________________________的特点。
(4)制备单克隆抗体也可以用动物细胞融合技术，与动物细胞融合过程不同，植物体细胞杂交在细胞融合之前要用____________________对细胞进行处理，作用是除去________。
——现代生物科技专题(第4小题1分，其他每空2分，共15分)
根据所学生物学知识回答：
⑴如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的 中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的 上。
⑵目前临床上使用的红细胞生成素(一种糖蛋白，用于治疗肾衰性贫血)主要来自基因工程技术生产的重组人红细胞生成素(rhEPO)。检测rhEPO的体外活性需用抗rhEPO的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的 细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠 细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。
⑶在“试管牛”的培育过程中，采用激素处理可使良种母牛一次排出多枚卵母细胞，最常用的激素是 。从良种公牛采集的精子需 后才能进行受精作用。在胚胎移植前，通过 技术可获得较多胚胎。
⑷生态系统内即使某个物种由于某种原因而死亡，也会很快有其他物种占据它原来的生态位置，从而避免系统结构或功能失衡。这体现了生态工程的什么原理( )(1分)
| A．协调与平衡原理 | B．物种多样性原理 |
| C．物质循环再生原理 | D．整体性原理 |
（原创）在转B基因（B基因控制合成毒素蛋白B）抗虫棉商品化的同时，棉虫对毒素蛋白B产生抗性的研究也正成为热点。请分析回答：
（1）棉虫对毒素蛋白B的抗性增强，是在转B基因抗虫棉的选择作用下，棉虫种群中抗B基因 的结果。为减缓棉虫种群对毒素蛋白B抗性增强的速度，可以在抗虫棉田区间隔种植 。
（2）豇豆胰蛋白酶抑制剂（由D基因控制合成）可抑制昆虫肠道内蛋白酶活性，使害虫减少进食而死亡。研究者将同时含B基因和D基因的__________________导入棉花细胞中，获得转基因棉。与只转入B基因的转基因棉相比，棉虫种群对此转基因棉抗性增强的速度减缓。
（3）从防止抗虫基因通过花粉扩散至其他近缘植物中，提高转基因植物安全性，理论上可将抗虫基因转入棉花细胞的 （选填选项前的符号）。
a．细胞核 b．叶绿体 c．线粒体 d．核糖体
（4）棉花短纤维由基因A控制，研究者获得了多个基因型为AaBD的短纤维抗虫棉植株。其中B基因和D基因始终位于同一条染色体上，减数分裂时不发生交叉互换。
①植株I相关基因位置如图1，该植株自交，F1中长纤维不抗虫植株的基因型为 ，能够稳定遗传的长纤维抗虫植株的比例是 。
②植株II自交，F1性状分离比是短纤维抗虫：长纤维不抗虫3：l，则植株II中B基因和D基因位于 染色体上（填图2中编号）。
③植株III自交，F1性状分离比是短纤维抗虫：短纤维不抗虫：长纤维抗虫=2：1：1，则植株III产生的配子的基因型为 。
2011年11月,我国首例“第三代试管婴儿”(设计试管婴儿)在上海诞生,这是上海生殖辅助技术领域一个新的里程碑。请回答下列问题:
(1)第一代试管婴儿针对女性输卵管堵塞患者,用穿刺针将____________________(细胞)取出,采集的细胞需要在体外培养到________________,才能与________________受精。第二代试管婴儿则针对男性少、弱、畸形精子症患者,通过______________技术将精子注入卵母细胞内帮助受精。第三代试管婴儿只是在胚胎移植前____________________,从而帮助更多的家庭生出健康的宝宝。
(2)试管婴儿操作过程中需在_________________℃条件下及______________环境中进行。用来培养受精卵的营养液除含水和无机盐以外,还需添加___________________等物质。
(3)母体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生________________,这为胚胎在母体内存活提供了可能。
(4)现在我国大多数人反对设计婴儿性别,原因是_______________________，在进行试管婴儿设计时一定不能违反__________________。
（5）试管婴儿技术主要用到了胚胎工程中的_______________技术和_____________技术，同时还用到了细胞工程中的____________技术。
【生物—选修1：生物技术实践】回答下列有关基因工程问题。
草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。
（1）下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。
（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是_____________________________________________，主要从_______________中提取。
图所示的酶M和酶N是两种限制酶，图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明。
酶M特异性剪切的DNA片段是___________，则酶N特异性剪切的DNA片段是 ____________________。
多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有 ____________种。
图的A和B分别表示两段DNA序列。表格分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。
（3）据图：假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图A所示，则应选择表格中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图A和B所示，则应选择表中酶__________进行酶切。
（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图B所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。
图甲是目的基因EPSPS（4.0kb，1kb=1000对碱基）与pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成某种酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）
（5）将处理后的目的基因EPSPS与pUC18质粒、DNA连接酶混合后，再与某菌种混合，若要从混合物中筛选出含EPSPS基因的菌株，在图三十二乙的培养基中必须加入________________________。请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种颜色菌落会含有重组质粒___________。
（6）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和_______________kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）。假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因是______________________________________________。
人红细胞生成素（htPA）是一种重要的蛋白质，它可以治疗贫血症，可通过转基因技术大量生产。下图是通过转基因羊生产红细胞生成素的过程。请据图回答：
（1）若需在短时间内获得较多的红细胞生成素基因，通常采用 技术。将该基因导入受精卵常用的方法是 。
（2）红细胞生成素基因与质粒用 限制性核酸内切酶切割后，通过DNA连接酶连接，构建基因表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞的DNA，可采用 技术。
（3）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其 。采集的精子需要经
过 处理，才具备受精能力。
（4）为了获得多个相同的转基因母羊，常采用 的方法，该方法操作的最佳时期是胚胎发育
的 期。
[生物—选修3：现代生物科技专题]胚胎工程和基因工程目前在生物技术中发展较快，回答下列问题：
(1)在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行________处理。另外，培养的卵母细胞需要发育至___________，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体。
(2)利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞进行核移植的原因是__________________________________________________________。
(3)若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、_________、终止子、标记基因和复制原点等。目前常用的措施是将该基因表达载体导入牛的_____(填“受精卵”或“乳腺细胞”)，导入方法是____________________。
试题篮
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