苏云金芽孢杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。
（1）将图中①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有________种DNA片段。
（2）基因工程的核心步骤是____________________。
（3）图中②表示HindⅢ与BamHⅠ酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得________种重组质粒；如果换用BstⅠ与BamHⅠ酶切，目的基因与质粒连接后可获得________种重组质粒。用BstⅠ与BamHⅠ酶切后的目的基因片段含有________个游离的磷酸基团。
（4）目的基因插入质粒后，不能影响质粒的_____________________。
（5）重组质粒是否导入受体细胞，在分子水平上的经检测方法是 。
（6）图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T－DNA导入植物细胞，并防止植物细胞中________对T－DNA的降解。
（7）已知转基因植物中毒素蛋白只与某些昆虫肠上皮细胞表面的特异性受体结合，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞________________________。
（8）生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的________基因频率的增长速率。
人们应用生物工程技术可以获得所需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：
（1）获得上述各种目的基因的常用方法除人工合成法、反转录法外，还可以从 中获取，然后再利用 进行大量扩增。
（2）转基因牛可通过分泌乳汁来生产人生长激素，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有启动子，它是__________的结合位点。
（3）prG基因的产物能激发细胞不断分裂，一般采用 技术将prG基因导入受体细胞Ⅱ中，图中Ⅱ应是 。若将图中prG基因换成甲肝抗体基因，则图中Ⅱ可能是
等。
（4）④过程中的受体细胞如果采用愈伤组织细胞比直接采用叶肉细胞更好，原因是 。⑤过程采用的技术是 。
下图为科学家通过基因工程方法培育转基因抗虫棉的大致过程。请据图分析回答：
（1）图中①过程需要的酶有 、 ，图中A的组成，除了目的基因外，还必须有 、 、 和复制原点。
（2）目的基因能否在棉株体内稳定遗传的关键是 ，检测时常采用的方法是 。
(3) 农杆菌中Ti质粒上的T-DNA具有 的特点。图中②过程的方法称为 。
（4）图中③过程常采用的生物技术是 ，此技术首先需通过细胞的 过程，培养出 ，然后经再分化形成小植株，其原理是 。
（5）图中③过程培育到 ，将其包上人工种皮，可制成神奇的人工种子。
下图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病（基因缺陷导致胰岛B细胞不能正常合成胰岛素）的过程设计图解，据图回答：
（1）图中①、②所示的结构分别是______________、_______________，④过程常用的方法是___________。
（2）图示治病的方法叫做_______________________，与一般的异体移植相比最大的优点是____________________。
基因工程自20世纪70年代兴起后，发展迅猛，成果显著。
Ⅰ利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是 ______。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用 处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为 __________ 。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成蛋白质，常用______________________技术。
Ⅱ近10年来，PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室的一种常规手段，下图为PCR原理示意图，据图回答问题。
（1）基因工程中，利用PCR技术来________________，PCR技术依据的原理是DNA的半保留复制，生物体内也能完成DNA的复制，但有所不同，图中A过程称为____________，在生物体内需要____________才能完成。图中B 过程的完成需要_________等条件。
（2）若DNA样品的长度为100个碱基对，且A占15%，则完成三次循环，共需要提供的胞嘧啶脱氧核苷酸___________个。
生物科学技术发展日新月异，解决了一些社会需求，据此回答下列问题
⑴ 基因工程中在构建基因表达载体时常要用到 和 两种工具酶。如果要使目的基因在乳腺细胞中表达，基因表达载体构建时要将目的基因与 、标记基因和 等组件重组在一起构建重组DNA分子所用。
⑵为获得足够数量的受精卵，先利用 刺激供体雌鼠，使其超数排卵。获取牛的卵母细胞的方法是 和 。
⑶早期胚胎培养的培养液成分一般比较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加维生素、 、氨基酸、核苷酸以及 等营养成分。当胚胎培养到适宜的阶段时，可进行胚胎移植。
⑷在胚胎移植前要对接受胚胎的受体进行 处理。移植后，还要对受体进行 。
荧火虫能发光是因为荧火虫体内荧光素酶催化的系列反应产生的现象。如果荧光素酶存在于植物体内，也可使植物体发光。一直以来荧光素酶的惟一来源是从荧火虫腹部提取，但加利福利亚大学的一组科学家成功地通过转基因技术将荧光素酶基因导入到大肠杆菌体内，并在大肠杆菌体内提取到荧光素酶。请你根据已有的知识回答下列有关问题：
(1)在此转基因工程中，目的基因是______________。
(2)在该过程中需要多种酶的参与，其中包括______________________________。
(3)将此目的基因导入到大肠杆菌体内需要运载体的帮助。下列所列各项是选取运载体的时候必须考虑的是___________________。（多选）
| A．能够在宿主细胞内复制并稳定保存 | B．具有特定的限制酶切点 |
| C．具有与目的基因相同的碱基片断 | D．具有某些标记基因 |
(4)由于荧光素酶的特殊作用，人们一直设想将其基因作为实验工具，将它和某一基因连接在一起,通过植物是否发光来确定该基因是否已经转入到植物体内，如判断固氮基因是否成功导入某植物体内。在此情况下，目的基因是 。
(5)与诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的优点是______________________。
2006年新华网郑州5月2日电（记者林嵬）转基因抗虫棉，就是通过生物技术，把一种细菌的遗传物质（DNA）片段转移到棉花里，让棉铃虫一吃就死，具有抗虫性状的棉花。下图表示从苏云金杆菌分离出来的杀虫晶体蛋白质基因（简称Bt基因）及形成转基因抗虫植物的图解，请据图回答问题：
（1）从供体细胞的DNA中直接分离基因最常用的方法是______________。
（2）获得Bt基因后，在连接到运载体上时，常用到的酶是__________。最常用的运载体是质粒，其化学本质是_________。
（3）科学家最初做抗虫棉试验时，虽然检测出棉的植株中含有Bt基因，但棉铃虫并没有被杀死，说明Bt基因还不能在高等植物中________。后来科学家对Bt基因作了适当的修饰，这种对Bt基因所作的修饰发生在__________部位。
（4）欲快速培育大量该抗虫新品种，应采用的技术是________________________，依据的理论基础是_________________________。
下图是基因工程方法培育抗虫棉的过程。请回答相关问题：
（1）通过A过程构建重组质粒时，需要两种工具酶是_______________和________________。其中能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使特定部位的两个脱氧梭苷酸之间的磷酸二酯键断开的是__________________。
(2)常用农杆菌转化法将抗虫基因导入棉花细胞，是因为其Ti质粒上具有__________，它能把目的基因整合到受体细胞的染色体DNA上。
(3)棉花细胞经过E过程形成抗虫棉植株，E过程是利用_____________________技术完成的，其原理是_____________________。要确定抗虫基因导入棉花细胞后，是否赋予了棉花抗虫特性，还需要在个体水平上做抗虫实验。
(4)将目的基因导入植物细胞，除采用上图所示农杆菌转化法外，还可采用基因枪法和__________________。
新兴生物工程能使免疫学在应用方面更上一层楼，为人类带来福音。一方面新兴生物工程可以为免疫活性物质及疫苗的制备开辟新途径，解决免疫治疗及免疫预防方面的难题；另一方面，新兴生物工程还可以为解决器官移植所面临的供体不足和免疫排斥两大难题提供可能。
（1）利用 技术发展起来的杂交瘤技术，为制备单克隆抗体开辟了新途径，与传统方法获取的同类产品相比，它的显著优点是 ；
（2）干扰素及部分疫苗都可以通过 技术制造的工程菌来大规模生产，如国内应用较普遍的重组CHO乙肝疫苗；
（3）对大面积烧伤病人，借助 技术可获取大量自身健康皮肤用于移植。
（4）通过向供体动物基因组中导入某种调节因子，以抑制 的表达，或设法将之去除，再结合 技术，可培育出无免疫排斥的转基因猪器官；
（5） 的分离和培养成功也为解决上述难题开辟了新途径，因其具有
性，可在体外诱导分化产生各种人造组织器官。
阅读如下材料：
材料甲：科学家将牛生长激素基因导入小鼠受精卵在，得到了体型巨大的"超级小鼠"；科学家采用农杆菌转化法培育出转基因烟草。
材料乙：溶菌酶在温度较高时易失去活性，科学家对编码
溶菌酶的基因进行改造，使其表达的
溶菌酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸，在该半胱氨酸与第97为的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，提高了
溶菌酶的耐热性。
材料丙：兔甲和兔乙是同一物种的两个雌性个体，科学家兔甲受精卵发育成的胚胎移植到兔乙的体内，成功产出兔甲的后代，证实了同一物种的胚胎课在不同个体的体内发育。
回答下列问题：
（1）材料甲属于基因工程的范畴。将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用法。构建基因表达载体常用的工具酶有和。在培育转基因植物是，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是。
（2）材料乙属于工程范畴。该工程是指以分子生物学相关理论为基础，通过基因修饰或基因合成，对进行改造，或制造一种的技术。在该实例中，引起4溶菌酶空间结构改变的原因是组成该酶肽链的序列发生了改变。
（4）材料丙属于胚胎工程的范畴。胚胎移植是指将获得的早期胚胎移植到种的、生理状况相同的另一个雌性动物体内，使之继续发育成新个体的技术。在资料丙的实例中，兔甲称为体，兔乙称为体。
由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的 -淀粉酶 基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。
（1）图甲中，过程①需要的酶有 。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是 。
（2 ）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是 ；推测该同学接种时可能的操作失误是 。
（3 ）以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种菌的发酵罐需要先排气，其原因是。
（4 ）用凝胶色谱法分离一淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较 。
回答下列有关遗传信息传递和表达的问题。
上图表示利用致病病毒M的表面蛋白基因和无害病毒，通过基因工程制作重组
病毒疫苗的部分过程。其中①~⑤表示操作流程，
表示分子或结构。据图回答问题。
（1）基因工程除了微生物基因工程外，还有。在上图所示过程中，获取目的基因的步骤是流程（用图中编号回答）；在流程③中必需实施的步骤有。
（2）在上图所示的整个过程中，用作运载体的来自分子（用图中字母回答）。
（3）下列关于质粒运载体的说法正确的是（多选）。
| A． |
使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解 |
| B． |
质粒运载体只能在与目的基因重组后进入细胞 |
| C． |
质粒运载体可能是从细菌或者病毒的 |
| D． |
质粒运载体的复制和表达也遵循中心法则 |
| E． |
质粒运载体只有把目的基因整合到受体细胞的 |
| F． |
没有限制酶就无法使用质粒运载体 |
（4）据图比较结构和结构
的异同，并解释产生差异的原因。
从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌体和溶血性均较强的多肽。目前在
的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做的是（）
| A． |
合成编码目的肽的
|
| B． |
构建含目的肽
|
| C． |
依据
|
| D． | 筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽 |
克隆猪成功率较低，与早期胚胎细胞异常凋亡有关。l-2基因是细胞凋亡抑制基因，用PCR技术可以检测该基因转录水平，进而了解该基因与不同胚胎时期细胞淍亡的关系。克隆猪的培育及该基因转录水平检测流程如图。
请回答：
(1)图中重组细胞的细胞核来自细胞，早期胚胎移入受体子宫继续发育，经桑椹胚、囊胚和胚最终发育为克隆猪。
(2)在过程中可检测出
中
l-2
的分子数，进而计算总
中
l-2
的分子数，从而反映出
l-2基因的转录水平。
①图中表示过程。
②从基因组数据库中查询l-2
的核苷酸序列，以便根据这一序列设计合成用于
扩增，
过程第一轮循环的模板是。
试题篮
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