人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用
正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。
（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从处死的雌鼠 中获取。
（2）图中的高血压相关基因作为 ，质粒作为 ，二者需用 切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有 有关。
（3）子代大鼠如果 和 ，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。
（4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是
、 和 。
2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
（1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
。
②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来 ，理由是： 。
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用的方法是 _。
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是 。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是，可以避免发生 反应。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是： （用数字表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）
④表达出蓝色荧光蛋白。
(附加题10分) 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC— ，限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—; Gene I是抗氨苄青霉素基因，Gene II是抗四环素基因。根据图示回答下列问题：
（1）用限制酶II切割DNA后得到的是两个 末端。限制酶I剪切得到的一个末端可以画为 。
（2）本实验中若要得到符合要求的重组质粒，应该用 切割质粒，用 切割目的基因。然后用 处理混合物得到重组质粒。
（3）把重组质粒导入动物细胞的方法一般是 。要把成功导入目的基因的受体细胞筛选出来，应该将细胞放在含有 的培养基中选择培养。
（4）不同生物的基因可以拼接的原因是 。
下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的过程，图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉索抗性基因，BamHI、Bau3A I、Bst I、Haclll、Not I所指位点为限制酶的酶切位点，五种酶的识别序列及切割位点在下表中。据图表回答：
（1）将双链DNA在中性盐溶液中加热，两条单链分开，叫做DNA变性。变性后的DNA如果慢慢冷却，又能恢复为双链DNA，叫做退火。大量的如右图中N元素标记的DNA在变性后的退火过程中会形成 种DNA。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的Not I酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。
（3）要将人乳蛋白基因插入载体，如果只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因，应选择的限制酶是 。
（4）筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。
（5）若从细胞中提取DNA和RNA，通过基因工程的方法，转移到另一种细胞时，转入DNA比转入RNA要有优势，理由是
（6）供体牛的受精卵的性染色体组成为 。在胚胎移植过程中，供、受体牛选择好后，要用激素进行同期发情处理的原因是 ，以保证移植的胚胎能够继续正常发育
（7）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用 技术。
科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：
（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶___________和限制酶___________分别对___________和质粒进行切割。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有______作为标记基因。
（3）研究人员通常采用___________法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质通常采用___________技术。
（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的___________和___________过程。
根据模拟制作重组DNA分子的活动，甲DNA分子、乙DNA分子被EcoRI （作用于G A A T T C序列）酶切后，即可获得所需的目的基因和质粒。回答以下问题：
（1）绿色硬纸板（甲DNA分子）的碱基序列为：
……A T A G C A T G C T A T C C A T G A A T T C G G C A T A C……
……T A T C G T A C G A T A G G T A C T T A A G C C G T A T G……
红色硬纸板（乙DNA分子）的碱基序列为：
……T C C T A G A A T T C T C G G T A T G A A T T C C A T A C……
……A G G A T C T T A A G A G C C A T A C T T A A G G T A T G……
其中， DNA分子（填甲或乙）含有“目的基因”，另一个 DNA分子即是“质粒”。
（2）用剪刀代表酶的切割。酶切位点在 （a处还是b处），此化学键称为 。请用“||”在甲、乙两DNA分子上标出EcoRI的作用位点。
（3）你模拟插入的DNA片断能称得上一个基因吗？ 。（填能或不能）
（4）从基因文库中获取目的基因是常用方法，基因文库实际上就是指导入了某种生物不同基因的许多DNA片断的受体菌的群体。按照其中所含基因量的多少又可分为 文库和 文库。
(16分)有机磷杀虫剂具高效杀虫能力，但会在果蔬中残留而危害人体健康。下图为科学家通过构建工程菌的方法来大量生产有机磷杀虫剂水解酶（简称“OPH”）的过程，请回答： 
(1)过程①用到的工具酶是______________，该酶的作用特点是_______________________________。
(2)检测OPH基因是否插入到酵母菌的染色体上所用的方法是______________。
检测时，需用放射性同位素标记的含_____________的DNA片段作探针。
(3)要筛选出OPH基因成功表达的酵母菌，需在酵母菌培养液中添加A物质，该物质是____________。
(4)科学家定点诱变OPH基因，使OPH的254和257位组氨酸发生改变，导致酶的活性提高近20倍。此项技术属于_________________________工程(2分)。
（5）以OPH为主要成分的“果蔬农药降解灵”已投放市场。但有人对OPH清洗蔬果的安全性提出质疑，请表明你的观点并说出一个理由：_________________________________________________ (2分)。
（6）在上述果醋和果酒的发酵装置中，在酵母菌只进行有氧呼吸时，其吸氧量和二氧化碳的释放量__________。果酒进一步发酵获得果醋，酒变醋的原理是___________________________________。
土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌，它带有一个大的质粒叫Ti质粒，它是携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。转化过程如图所示，回答相关问题：
（1）从细胞结构的特点与复杂程度看，土壤农杆菌属于 细胞，其质粒是能够自主 的环状DNA分子。
（2）为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即去除瘤基因，将抗旱基因插入至 ，然后在一定条件下将外植体在含 的稀释培养基上培养，此时修饰的T—DNA转入植物细胞并整合到植物基因组中。
（3）将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选，发生转化的外植体开始增殖，形成 ，通过产生不定芽和体细胞胚再长出整个植物。
（4）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，可以直接在 水平对转基因植物与非转基因植物进行比较；为获得纯合的转基因植株，还需要对转基因植株进行 。
回答有关生物工程的问题。
小鼠是实验室常用的实验动物，如：利用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体、利用小鼠进行DNA重组研究中导致了“基因敲除”技术的出现。
用小鼠制备抗X病毒单克隆抗体。
（1）．将小鼠等分为两组，甲组定期间隔注射适量的含X病毒的溶液，其目的是____________________；乙组注射________________（作对照）。
（2）．为了保存有价值的杂交瘤细胞系，通常用超低温将其冻存，请分析其原因____________
___________________。
用小鼠进行DNA重组研究中形成的“基因敲除”技术，能“敲除”DNA分子上的特定基因。该技术的主要过程如下：
第一步：分离小鼠胚胎干细胞，这些细胞中含有需要改造的基因，称“靶基因”。
第二步：获取与“靶基因”同源的DNA片断，利用特定技术在该DNA片段上插入neoR基因（新霉素抗性基因）成为突变DNA（如下图），使该片段上的靶基因失活。
第三步：将插入neoR基因（新霉素抗性基因）的靶基因转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造。
第四步：将第三步处理后的胚胎干细胞，转移到特定培养基中筛选培养。
其基本原理如下图所示：
（3）．第二步中neoR基因插入靶基因使用的工具酶是 。neoR基因不仅能使靶基因失活，还可作为 ；“靶基因失活”的根本原因是 。
（4）．从研究者成功获得如上图所示的“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，到将该细胞培育成“基因敲除”小鼠，运用到的生物技术有 、 等。
将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。请根据以下面的图表回答下列问题。
（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内 的DNA聚合酶，其最主要的特点是 。
（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。
（3）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为 。
（4）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。
①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
（1）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？并说出理由：
（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是 。
（3）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是 。获得的转基因克隆猪，可以通过对抗原表达基因的改造从而解决的医学难题是：可以避免 。
（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是： （用数字表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列 ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列 ③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成） ④表达出蓝色荧光蛋白。
( 22分)长期以来优良种畜的繁殖速度始终是限制畜牧养殖业发展的瓶颈，近年来发展起来的细胞工程技术和胚胎工程技术为优良种畜的快速繁殖带来了无限生机。其中，在我国山东省曹县山东中大动物胚胎工程中心，2001～2002年不仅诞生了首批“中国造”克隆牛，而且也成功繁育了我省第一头通过体外授精而成功繁育的“试管牛”。下面是科学家通过这两种方法快速繁殖良种奶牛的过程，请据图回答：
(1)在试管牛E和克隆牛G的培育过程中均用到的细胞工程技术有 和 。
(2)成熟的精子必须经过 过程才具有受精能力。
(3) 在产生E牛的过程中，卵细胞和精子在受精阶段中有两道屏障，它们分别是 和 。
(4)克隆牛G的性别是 ，试管牛F的性别是 。
(5)在正常情况下，判断卵子是否受精的重要标志是 。
(6)Ⅱ过程优质奶牛的培育过程需要进行胚胎移植，移植后的胚胎能在受体子宫中存活，其生理基础是 。
(7)要培育高产奶率的转基因牛，则目的基因的受体细胞一般是 。转基因牛乳腺细胞能分泌一些乳清蛋白，则参与乳清蛋白分泌的细胞器的有 。
人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。
（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从处死的雌鼠________中获取。
（2）图中的高血压相关基因作为__________，质粒作为_________,二者需用________切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有________有关。
（3）子代大鼠如果________ 和__________ ，即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。
（4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是___________、早期胚胎培养和胚胎移植。
人类在预防与诊疗传染性疾病的过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和抗体制备的流程之一如图所示；
请回答：
（1）过程①需利用逆转录酶，该酶应属于 （A．RNA聚合酶 B．DNA聚合酶 C．转录酶）。
（2）过程②构建A基因表达载体时，必须使用 和DNA连接酶两种工具酶。
（3）过程③采用的实验技术是 ，经过③获得的融合细胞有 种，X是 ，能把X筛选出来的方法是利用 。
（4）获得的X细胞在体外既可 ，又可 。X细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是_____________。
（5）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的 所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病
毒进行 比较；或用图中的 进行特异性结合检测。
为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法（如下图）：请根据图示信息完成问题：
（1）试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的工程技术有_____________________等。
（2）用来促进B牛多排卵的激素可能是___________分泌的促性腺激素。E牛的性别是___________。
（3）产生F牛的理论依据是______________________，其生殖方式属于___________。
（4）要培育高产奶率的转基因牛，则目的基因的受体细胞一般是___________，转基因牛乳腺细胞中含有较多的参与分泌物加工的___________等细胞器。
试题篮
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