分毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。
(1)过程①中最常用的运载工具是_______，所需要的酶是限制酶和____________。
(2)在过程②中，用________处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞至于5％CO2的气体环境中，CO2的作用是_________。
(3)在过程③中，用_______处理以获取更多的卵（母）细胞。成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行________处理。
(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是_________。在胚胎移植前，通过_______技术可获得较多胚胎。
请回答下列有关现代生物技术的问题。
如图是利用现代生物技术改良草莓品系的过程。
（1）请写出图中涉及的现代生物技术中的2项___________________________________。
（2）研究人员根据已知的胰岛素基因序列，采用________方法获得了胰岛素基因。
（3）图中A培育至具有凤梨风味的绿草莓幼苗的过程，_______（是、否）体现植物细胞的全能性。
（4）转基因技术和细胞工程在动植物都有广泛应用，但是，胚胎工程只是指对动物的___________________所进行的多种显微操作和处理技术。
（5）不断恶化的生态环境，正在对人类的生存和发展构成严重的威胁。运用生态工程可对遭到破坏的生态环境进行修复和重建。生态工程建设的目的是遵循自然界 的规律，充分发挥资源的生产潜力，防止 ，达到生态效益与经济效益的同步发展。生态工程是实现循环经济最重要的手段之一，请写出它遵循的基本原理中的3项： 。
小鼠弯曲尾（B）对正常尾（b）显性，将一弯曲尾雄鼠与一正常尾雌鼠交配，F1为弯曲尾雌鼠∶正常尾雄鼠=1∶1。遗传学家将一个外源DNA片段导入到F1代弯曲尾雌鼠的体细胞中，利用克隆技术获得一只转基因正常尾小鼠。该DNA片段插入小鼠染色体上的位置有多种可能，下图表示了其中2种。(说明：插入的DNA片段本身不控制具体的性状；小鼠体内存在该DNA片段时B不表达，但b基因的表达不受影响。)请回答有关问题：
（1）在获得转基因动物的过程中，最常用的运载工具是__________，限制酶识别双链DNA分子的 ，并切割DNA双链。
（2）控制小鼠尾形的基因位于___________染色体上，子一代雌鼠的基因型是____________。
（3）为确定转基因小鼠DNA具体的插入位置，研究者让该转基因小鼠与非转基因正常尾雄性小鼠杂交，统计子代的表现型种类及比例，并进行了以下分析（不考虑交叉互换）：
①若子代_____________，则该DNA片段的插入位置属于第1种可能性；②若子代_____________，则该DNA片段的插入位置属于第2种可能性。
(12分)
现代生物技术制备H7N9病毒单克隆抗体的流程，请回答问题。
(1)①过程表示_____________，②过程用到的工具酶是______________。
(2)构建基因表达载体时，目的基因的首端必须含有_____________，它的作用是_____________，尾端必须有____________,标记基因的作用____________________________，③过程常用的方法是_____________，目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是______________。
(3)从分子水平上鉴定目的基因是否转录可采用____________技术，检测目的基因是否翻译成蛋白质采用的方法_______________
(4)若要预防H7N9禽流感，可用图中的_____________作为疫苗。
在对番茄的研究中发现，害虫损伤番茄叶片后，叶上的细胞壁能释放出一种类激素因子，这种物质通过细胞组织扩散到茎和其他叶片上，启动蛋白酶抑制剂的基因后，开始高效合成蛋白酶抑制剂，并在茎叶中迅速积累，以对付害虫的再次侵袭。蛋白酶抑制剂对害虫的消化酶有抑制作用，害虫取食后，因无法消化食物而被杀死。人们尝试将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米，让玉米获得与番茄相似的抗虫性状，以对付异常猖獗的玉米螟(一种玉米害虫)。
根据上述材料，回答下列问题：
（1）番茄的蛋白酶抑制剂很可能是在茎叶细胞的 处合成的。
（2）将番茄的蛋白酶抑制剂基因导入玉米内，使玉米形成新的性状，这种变异属于 。
（3）玉米获得番茄的“蛋白酶抑制剂基因”产生蛋白酶抑制剂，这一遗传信息表达的过程为 。
（4）能抗玉米螟的抗虫玉米的生态效益显著，有人认为抗虫玉米就是无虫玉米，不必防治害虫。你是否赞成这种说法？ 。说明理由： 。
（5）有人对食用这种转基因玉米的安全性感到担忧。你认为这种担忧有道理吗？ 。试用学过的知识进行简要的分析说明 。
在菲律宾首都马尼拉郊外的一片稻田里，一种被称为“金色大米”的转基因水稻已经悄然收获。这种转基因大米可以帮助人们补充每天必需的维生素A，由于含有可以生成维生素A的β一胡萝卜素，它呈现金黄色泽，故称“金色大米”。“金色大米”的培育流程如图所示。请回答下列问题.(已知酶I的识别序列和切点是 -G↓GATCC-，酶II的识别序列和切点是-↓GATC-)
（1）培育“金色大米”的基因工程操作四步曲中，其核心是 。通过该操作形成了图中的c，它的构成至少包括目的基因、标记基因、复制原点和 等。
（2）在研究过程中获取了目的基因后采用 技术进行扩增，在构建c的过程中目的基因用 (限制酶Ⅰ或限制酶Ⅱ)进行了切割；检验重组载体导入能否成功需要利用 作为标记基因。
（3）过程d通常采用 方法，过程e运用了植物组织培养技术获得符合要求的个体。在该技术应用的过程中，关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行 和 。
（4）若希望该转基因水稻生产的“金色大米”含维生素A含量更高、效果更好，则需要通过 工程手段对合成维生素A的相关目的基因进行设计。
回答有关遗传信息的传递和表达的问题。
肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图１。请回答下列下列问题。
（1）、进行过程①时，需用到的酶有 。
（2）、下列关于继续培养过程的说法错误的是 （多选）
| A．可以用血清或淋巴液作为培养基 |
| B．应该将培养温度控制在37℃左右 |
| C．培养基PH值范围5.6～5.8 |
| D．培养过程应用了细胞分化的原理 |
研究发现，let-7基因能影响RAS的表达，其影响机理如图２。在基因工程中，通常可以用分子杂交技术（即用同位素或荧光标记的基因单链DNA片段进行杂交）来判断目的基因是否在受体细胞中表达。
（3）、据图2分析，可从细胞中提取 进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 （RASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起。
(4)、下列四幅图中能正确反映目的基因转录产物内部结构的是___________。
TSS：转录起始位点，TTS：转录终止位点，STC：起始密码子，SPC：终止密码子
（5）、研究人员用DNA测序仪显示了RAS基因某片段的碱基排列序列图片。其中图3的碱基排列顺序已经解读，碱基顺序是：GGTTATGCGT，请解读图4显示的碱基排列顺序： 
矮牵牛花色丰富，易于栽培，是世界上销量最大的花卉之一。科研人员尝试通过增加更多控制色素形成的基因（CHS基因）使红花矮牵牛花瓣颜色加深。
（1）科研人员首先从红花矮牵牛的 细胞中提取mRNA，经反转录获得CHS基因。然后将CHS基因与 结合，通过 转化法，将其导入植物叶片中。将筛选出的成功导入CHS基因的叶片利用 技术培育获得转基因的矮牵牛植株。
（2）与预期结果相反，许多转基因植株的花色为白色。为探究其原因，研究人员从白花转基因植株和
植株的细胞中分别提取总RNA，然后以 作为探针进行分子杂交，结果发现转基因植株中CHS基因的RNA量减少。由此推测，生物体外源CHS基因的转入并未增加CHS基因的表达，甚至连细胞的 基因表达也受到抑制，从而使花色为白色。
（3）对上述现象的解释有两种观点。第一种观点认为可能由于 酶未能识别基因首端的
部位，从而不能进行转录。第二种观点认为由于某种原因细胞内转录出了部分与mRNA序列互补的反义RNA，反义RNA与mRNA形成了 ，从而降低了游离mRNA的含量。
（4）科研人员发现自然界中存在一种CHS基因表达受抑制的矮牵牛品种。它的表现型与上述转基因植物相似，研究发现它的细胞中CHS基因转录正常，结合此现象推测，上述对转基因矮牵牛开白花的两种解释中第 种成立的可能性更大。
回答下列有关基因表达和基因工程问题
人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因奶牛的乳汁中获得。图21表示利用奶牛乳汁生产人组织纤溶酶原激活物的培育过程：
(1)．在形成图中③的过程中，获取②的途径主要有 ，②进入③需要的 协助。
(2).为了在该奶牛乳汁中获得htPA必须将htPA基因连接在
A.乳腺蛋白基因的转录起始位点之后
B.乳腺蛋白基因的转录起始位点之前
C.起始密码子编码序列之后
D.乳腺蛋白基因的转录终止位点之后
(3)．培养从③到④的过程中一般用未受精的去核卵细胞为受体，不用普通的体细胞的原因
是 。
(4)．⑦与⑥的遗传性状不一样的理由是 。
(5).图为质粒限制酶酶切图谱。htPA基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的htPA基因重组进该质粒，扩增的htPA基因两端可分别引入 和 不同限制酶的识别序列。
血友病的病因之一是由于基因TPO突变而不能合成凝血因子。目前该病的临床治疗主要有两种基因疗法(如下图所示)。图中方法一是将基因工程菌生产的凝血因子注入患者体内；方法二是用含目的基因的重组病毒感染患者，使患者获得病毒直接提供的凝血因子。目前主要选择腺相关病毒（简称AAV）作为治疗用基因载体。AAV是有衣壳、无包膜的DNA小病毒，基因组含有病毒衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap，以及其他基因，但缺乏复制激活基因E，所以，AAV感染细胞后不会复制，对人体安全。当AAV和其他DNA病毒（含有基因E）同时感染人体细胞后，AAV会被激活复制、表达，形成病毒粒子（含DNA和衣壳），病毒粒子具有侵染能力。AAV病毒衣壳不能包装较大DNA分子。
（1）过程①②需要用的工具酶有 。
（2）经过②过程得到的重组AAV中去除了基因rep、cap，缩短了AVV的长度，使得AAV能结合 ；重组AAV转染细胞产生病毒粒子，需要人工重组辅助质粒，这是因为 。
（3）③过程转染细胞产生的病毒粒子中可能含有的质粒是 ，因此需要对用于基因治疗的病毒粒子进行检验、提纯。
（4）④过程需要用到 等技术。实验发现，用昆虫细胞、酵母菌、人体细胞承担重组质粒与重组AAV的转染，都能收集到凝血因子，这一现象说明 。
（5）⑥过程采用患者细胞作为感染的受体细胞，可以避免 反应；相对于⑤治疗方法，⑥治疗方法的优点是： 。
(12分，每空2分)目前，精子载体法逐渐成为最具诱惑力的制备转基因动物方法之一，该方法以精子作为外源基因的载体，使精子携带外源基因进入卵细胞受精。下图表示利用该方法制备转基因鼠的基本流程。请据图回答：
(1)外源基因能够整合到精子的 上是提高转化率的关键，因为受精时只有精子的头部（细胞核）才能进入卵细胞中。
(2)过程②采用的是 技术，该过程中应对已经导入外源基因的精子进行 处理。
（3)过程③需要在 培养液中进行（填培养液名称）。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全搞清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入一定量的 。
(4)为了获得更多的早期胚胎，常用 激素对供体进行处理，使其超数排卵，从而获得更多的卵母细胞。
(8分)人的血清白蛋白(HSA)有许多作用，如对血液中的免疫球蛋白(抗体)有保护和稳定的作用。如果免疫球蛋白缺少了这种保护，免疫力就会变得不稳定，容易引起各种疾病，所以在临床上需求量很大。白蛋白通常从人血中提取，产量受到限制。如果应用基因工程、克隆等技术，将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，利用牛的乳汁生产血清白蛋白就成为可能。如图是利用奶牛乳汁生产血清白蛋白的图解，请根据图解回答下列问题： 
(1)图中①一般经________处理可以得到③。将②导入③最为有效的方法是 。导入前，需要将②与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，这一步骤是基因工程的核心，称为______________________________________。
(2)通过核移植技术能够得到胚胎④，精、卵在体外受精时也能得到早期胚胎。在体外受精过程中防止多精入卵的生理反应主要包括____________反应和____________作用。
(3)若需要迅速得到大量转基因奶牛，可采用下列处理方法：将早期胚胎④处理后形成若干个胚胎⑤，此种方法称_____________。进行上述操作时，应选择发育至_______________或囊胚阶段的胚胎进行操作，对后者操作时必须注意将_______________________________。
请回答下列有关胚胎工程和基因工程方面的问题：
（1）目前，科学家通过细胞核移植实验，培育出多种哺乳动物新类型。在哺乳动物的核移植实验中，一般通过 （物理方法）将受体细胞激活，使其进行细胞分裂并发育，当胚胎发育到 阶段时，将胚胎植入另一雌性（代孕）动物体内。
（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行 处理。另外，培养的卵母细胞需要发育至 ，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体。
（3）利用体细胞进行核移植技术的难度明显高于利用胚胎细胞进行核移植的原因是 。
（4）若要使获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、 、终止子、标记基因和复制原点等。目前常用的措施是将该基因表达载体导入牛的 （填“受精卵”或“乳腺细胞”），导入方法是 。
(15分)如图为培育转基因抗虫棉的技术流程。请据图回答：
（1）进行过程①，先要运用的酶是 。
（2）基因工程核心步骤的名称是 。
（3）在培育成功的转基因抗虫棉的传种接代过程中，抗虫基因和标记基因是否遵循基因的自由组合定律 。为什么？ 。
（4）过程②采用最多的方法是 。在实验室中，检测抗虫基因是否整合到棉花细胞的DNA分子上的方法是 。
（5）经过③过程形成愈伤组织的细胞分裂方式是 。
（6）过程④所表达的两个重要的生理现象是 。
试题篮
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