下图中甲是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入质粒，可以只用EcoR I同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，也可以使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时酶切质粒和人乳铁蛋白基因，后一个方法的优点在于可以防止 。
（2）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入______酶。重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。
（3）从分子水平简述雌性转基因牛分泌人乳铁蛋白的过程是 。
（4）该雌性转基因牛经与普通雄性个体交配所产的雌性后代是否也能分泌含人乳铁蛋白的乳汁？为什么？ 。
红细胞生成素(EPO)是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。目前临床使用的是重组人红细胞生成素(rhEPO)，其简易生产流程如图所示。
请回答问题：
(1)图中①所指的物质是________，②所指的物质是________。
(2)基因表达载体导入中国仓鼠卵巢细胞系(CHO)最常采用的方法是____________，它的启动子是__________的识别和结合部位。
(3)CHO是仓鼠的卵巢细胞经过细胞培养过程中的___________________培养获得的无限增殖细胞。重组CHO细胞培养需要____________的环境及营养、温度、pH和气体环境适宜的条件。
(4)检测rhEPO的体外活性需用抗rhEPO的单克隆抗体。单克隆抗体的优点是 ，并可大量制备，它是由小鼠的骨髓瘤细胞与其特定 B淋巴细胞通过____________技术获得的杂交瘤细胞分泌的。
苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。图21是转Bt毒素蛋白基因植物的重组DNA形成过程示意图；图22是毒素蛋白基因进入植物细胞后发生的两种生物大分子合成的过程，据图回答下列问题。
（1）将图21①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有 种DNA片段。过程②需要用到 酶。
（2）假设图21中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图21中①的DNA右侧还能选择BamH Ⅰ进行切割，能获得所需重组质粒吗？并请说明理由 。
（3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒
| A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开 |
| B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开 |
| C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开 |
| D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开 |
（4）图22中
链是 。不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点 （在“都相同”、“都不同”、“不完全相同”中选择），其原因是 。
（5）要想检测导入的Bt毒素蛋白基因是否表达，在分子水平上可用 进行检测，如果出现杂交带，说明目的基因已经表达蛋白质产品，转基因植物培育成功。
毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因与绒山羊的羊绒质量密切相关。获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图。
(1)将KIFⅡ基因导入目的基因的细胞内，获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊这种新性状的产生所依据的原理是____________。从基因文库中获得的KIFⅡ基因可用_________技术进行扩增。过程①中最常用的运载工具是 。
(2)在过程②中，用___________处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养过程中，将成纤维细胞置于_____________混合的气体培养箱中进行培养。培养液中加入__________达到无菌环境。
(3)在过程③中，用______________处理以获取更多的卵（母）细胞,在体外培养到______________期通过显微操作进行去核处理。
(4)从重组细胞到早期胚胎过程中所用的胚胎工程技术是___________。在胚胎移植前，通过_________技术可获得较多胚胎。
自然界中能够产生生物荧光的酶的统称为荧光素酶。荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的利用。
（1）荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是将 筛选出来。
（2）下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，右下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法（只用一种酶）获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是 。
| 限制酶 |
Msp I |
BamH I |
Mbo I |
Sma I |
| 酶切位点 |
 |
 |
 |
 |
（3）利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用 的原理，使荧光素酶基因数量呈 方式增加。
（4）迄今为止，可将上述具有荧光素酶基因的运载体导入动物细胞的技术，应用最多的、最有效的是 。经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的 或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。
（5）囊胚阶段的胚胎进行胚胎分割，可以提高胚胎的利用率，但在进行分割时应注意 。
（6）荧光素酶在ATP的参与下，可使荧光素发出荧光。生物学研究中常利用“荧光素－荧光素酶发光法”来测定样品中ATP的含量。某研究小组对“测定ATP时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”进行了探究。
【实验材料】1×10－8mol/LATP标准液、缓冲溶液、70mg/L荧光素溶液（过量）、浓度分别为10、20、30、40、50、60、70mg/L的荧光素酶溶液。
【实验结果】见下图。
【实验分析与结论】
①实验过程：为使结果更加科学准确，应增设一组 作为对照。除题目已涉及的之外，还需要严格控制的无关变量有 （至少写出一个）。
②实验结果：由图C可知， 点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。
（7）食品卫生检验中，可利用上述方法测定样品中细菌的ATP总含量，进而测算出细菌的数量，判断食品污染程度。测算的前提是每个细菌细胞中ATP的含量 。
根据所学生物学知识回答下列问题：
（1）若要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的____________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的_____________上。
（2）一对表现正常的夫妇，其家族中都有遗传性囊性纤维化病（常染色体隐性遗传病）患者。医生对他们进行了遗传咨询后，决定运用试管婴儿的方法实现他们的优生愿望。医生首先为女性注射_____________，刺激卵泡成长，实现控制性超数排卵，然后在局部麻醉下从卵巢中吸取______________，并在显微镜下将其移到含特殊培养液的培养皿中，置于37℃培养箱中培养。再从男性体内采集精子经过____________处理，处理后的精子与卵细胞放在含有受精培养液的同一培养皿中完成体外受精。然后将受精卵移入发育培养液中继续培养，待发育到桑葚胚或囊胚时，分别对多个胚胎的细胞进行___________，选择出__________胚胎植入母亲_____________内，避免遗传病孩子出生。
(8 分)下图表示大肠杆菌细胞中组成核糖体的蛋白质( 简称 RP) 的合成及调控过程，
图中①和②表示相关的生理过程，mRNA上的 RBS 是核糖体结合位点。 请据图回答:
(1)图中启动子是________识别、结合的位点，①表示的生理过程是________。
(2)大肠杆菌细胞中 RNA的功能有________(从A一D中选)。
| A．作为遗传物质 | B．传递遗传信息 | C．转运氨基酸 | D．构成核糖体 |
(3)细胞中缺乏rRNA时，RP1与RBS结合，干扰了________，从而抑制了翻译的起始，当细胞中rRNA浓度高时，RP1与________结合，mRNA可以正常翻译，通过这种调节机制，可以避免细胞内物质和能量的浪费。
(4)大豆中的"染料木黄酮"是一种抗癌药物的成份，该物质能抑制rRNA的形成，导致细胞中________(填细胞器)数目减少，________速率减慢，抑制癌细胞的生长和增殖。
(9分)下图为科学家培育抗棉铃虫棉花的研究路线图。请据图回答:
(注:Kan 为卡那霉素抗性基因)
(1)A过程需要的酶有________。
(2)c过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入________。
(3)离体棉花叶片组织培养获得转基因抗虫植株所依据的理论基础是________。
(4)科学家发现某些转基因抗虫植株体细胞含两个抗虫基因，假设这两个基因在染色 体上随机整合，出现如图所示三种情况。假定抗虫基因都能正常表达，且各型配子活力相同。请设计实验，确定该转基因植株基因的组成是哪一种。
①实验步骤:
I选用该转基因抗虫植株与________进行杂交。
II观察并统计后代表现型和比例。
②结果预测:
I 若不考虑交叉互换________，则为图甲所示的基因组成;________，则为图乙所示的基因组成;________，则为图丙所示的基因组成。
II 若同源染色体的________之间发生一次交叉互换，则________(填"甲"、"乙"、" 丙") 的实验结果可能会与I的预测结果不同。
基因工程又叫做基因拼接技术。该技术能够通过对生物的基因进行改造和重新组合，产生出人类所需要的基因产物。自20世纪70年代基因工程发展起来以后，人们开始采用高新技术生产各种基因产品。下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1和图2示基因工程部分操作过程：
⑴从表中四种酶的切割位点看，可以切出平末端的酶是__________。
⑵将目的基因与质粒DNA缝合时，两条链上的磷酸、脱氧核糖在__________酶的作用下连接起来，形成磷酸二酯键；两条链间的碱基对通过__________连接起来。
⑶图2中的质粒分子可被表中__________酶切割，切割后的质粒含有_____个游离的磷酸基团。
⑷若对图中质粒进行改造，插入的Sma I酶切位点越多，质粒的热稳定性越_____。
⑸在相关酶的作用下，甲与乙能否拼接起来？并说明理由：_________________________。
2014年夏季广东爆发登革热疫情。病原体是雌伊蚊传播的登革热病毒，患者表现疼痛、发烧和出血。灭蚊是防控登革热的首选方法。英国人埃尔菲培育出“四环素合成缺陷基因”的雄伊蚊（必需定期食用四环素才能正常存活），有效地降低了野生伊蚊的种群数量。请回答：
（1）发烧的患者往往口渴，此时机体释放的 激素增多，促进 重吸水，降低细胞外渗透压。
（2）疼痛是登革热患者的普遍病征，参照下图，请用数字和箭头表示痛觉产生的途径 。 “布洛芬”能降低3内的多巴胺（DA）含量，起到镇痛作用。DA可使突触后膜内侧的电位发生 的变化。
（3）初次感染者体再次感染，机体快速发生体液免疫，请用文字和箭头说明其过程
。
（4）常用 法把目的基因导入受精卵细胞来培育转基因伊蚊。野外释放后，转基因雄伊蚊通过与野生型雌蚊杂交把目的基因传给子代，由于野生环境 ，子代不能成活，伊蚊种群数量大幅下降。
转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原基因，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示（①至⑥代表过程，A至E代表结构或细胞）：
（1）通过图中①过程得到的B叫做 ，②过程常用 处理农杆菌，有利于B转化到农杆菌中．
（2）图中③过程叫做 ，⑥过程叫做 ，此过程用植物的组织培养技术将叶盘培养成草莓幼苗．
（3）在分子水平上，可采用 的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的疫苗．
如图是利用基因工程技术产生人胰岛素的操作过程示意图，请据图回答：
（1）能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？_________原因是_________。
（2）过程②必须的酶是_________，过程③必须的酶是_________。
（3）若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则③④⑤连续进行4次，至少需要提供胸腺嘧啶_________个。
（4）图中B应该符合的条件为________、_________、_________。
（5）为使过程⑧更易进行可用_________药剂处理D。
回答下列有关基因工程的问题
细菌、真菌等微生物产生的β-葡萄糖苷酶是一种耐热纤维素酶，可分解自然界中的纤维素获得能源。现可通过基因工程将β-葡萄糖苷酶基因（bglB基因）与图28的质粒重组并导入大肠杆菌获得大量有活性的β-葡萄糖苷酶。（质粒中ori为质粒复制所必需的DNA序列，启动子是使转录开始的一段DNA序列，终止子是提供转录终止信号的DNA序列，抗生素抗性基因为标记基因，其余为不同限制酶的酶切位点，切割形成的黏性末端均不相同）
（1）．从高产β-葡萄糖苷酶的黑曲霉品种中提取到相应的RNA，进而获得bglB基因的DNA序列，这种获取目的基因的方法是____________________。
（2）．为避免自身环化并确保bglB基因与图一质粒准确重组，可选用的限制酶是（ ）
A NdeI和XbaI B NdeI和BamHI
C XbaI D PstI E BamHI
（3）．bglB基因通过 酶与质粒结合形成重组质粒。
（4）．图二培养基中含有刚果红和纤维素，可用于筛选纤维素酶产量高的重组菌，原理如图三。
据此分析，图二中的[ ]菌落即为纤维素酶产量最高的菌株。
（5）．在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高基因的突变率。与用诱变剂直接处理微生物相比，上述育种技术获得热稳定性高的bglB基因的效率更高，其原因是在PCR过程中（ ）（多选，2分）
| A．仅针对bglB基因进行诱变 |
| B．bglB基因产生了定向突变 |
| C．bglB基因可快速累积突变 |
| D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变 |
回答下列有关现代生物科技方面的问题：
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，一般选择能使二者产生___________(相同、不同)黏性末端的限制酶。
（2）在精卵结合过程中，防止多精入卵的第二道屏障称做： 。
（3）生态经济：使一个系统产出的污染物，能够成为本系统或另一个系统的生产原料，从而实现废弃物的资源化。“无废弃物农业”体现了生态工程 原理。
（4）若要获取转基因植物人工种子，需培养到_______________阶段，再进行人工种皮的包裹；如用植物细胞实现目的基因所表达的蛋白质类药物的工厂化生产，培养到_______________阶段即可。
（5）动物克隆技术：目前动物的克隆主要采用__________________技术来实现，我国禁止生殖性克隆，但不反对________________的研究。
因为猪的基因和人类的基因存在一定相似度。据报道经过特殊处理的猪皮可在人身上存活3周左右，起到保护创面免受感染的作用。移植猪皮后，还要在猪皮上开很多小口，移植患者的自体皮放入其中，自体皮慢慢生长，覆盖裸露的皮肤。而猪皮最终会掉光。为了使移植的猪皮存活更长时间，有人设法导入人的相关基因（用P表示），获得转基因小白猪。其简单流程如下图所示：
（1）过程①中形成重组DNA常用的酶有_________和___________；将目的基因导入成纤维细胞常用的方法是______________。
（2）过程②中，常用____________酶处理将皮肤组织块分散成单个成纤维细胞。在培养成纤维细胞时需要满足的条件是无菌、无毒的环境、________、温度和pH、________。
（3）过程③中所用的胚胎工程技术是_____________________，然后将早期胚胎移入另一头与供体_______________，但未经配种的代孕母猪的相应部位。
（4）图中的卵母细胞应在体外培养到__________________期。
试题篮
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