随着科学技术的发展，人们可以根据需求来改造生物的性状。如图是利用奶牛乳汁生产人类血清白蛋白的图解，据图回答问题。
(1)在此过程中涉及到的细胞水平现代生物技术手段主要有_______________。
(2)在基因工程中，我们称②为________，在②进入③之前要用________________等工具来构建基因表达载体，能实现②进入③的常用方法是________________。
(3)图中①一般经________处理可以得到③，从③到④的过程中一般利用去核后未受精的卵细胞作为受体，而不用普通的体细胞，原因是______________________________________________________。
(4)下列A～D中表示④到⑤过程中正确的操作方法的是________，把⑤送入⑥的最佳时期是________。
(5)⑦是⑥的后代，那么⑦的遗传性状和________最相似，为什么？___________ _
______________________________________________________________。如果②的数量太少，常用________来扩增。要实现⑦批量生产血清白蛋白，则要求③的性染色体是________，利用该方法得到的动物叫做____________。
(6)用这种方法生产药物与工厂化生产药物相比，前者的优越性在于__________。
(7)⑦ 和某些转基因羊可通过分泌乳汁来生产人类所需药物，这类转基因动物被称为________。
下图为单克隆抗体制备流程示意图。
(1)__________技术是单克隆抗体技术的基础。
(2)细胞融合是随机的过程，在HAT培养基中培养，目的是________________。在细胞培养过程中，培养液中需要添加无机盐，但要注意无机盐的________，以保证生命活动的正常进行。
(3)为选育出能产生高特异性抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到7～10个细胞/mL，每孔滴入0.1 mL细胞稀释液，其目的是________________________________________________。
（4）选出的杂交瘤细胞具备____________________特点。
（5）淋巴细胞是由动物体__________中的__________细胞分化、发育而。
（6）下图表示从正常人和患者体内获取的P53基因的部分区域。与正常人相比，患者在该区域的碱基会发生改变，已知限制酶E识别序列为CCGG，若用限制酶E分别完全切割正常人和患者的P53基因部分区域（见下图），那么正常人的会被切成__________个片段，而患者的则被切割成长度为__________对碱基的两种片段。如果某人的P53基因部分区域经限制酶E完全切割后，共出现170、220、290和460碱基对的四种片段，那么该人的基因型是__________（以P+表示正常基因，Pn表示异常基因）
(13分)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：
(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。
(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越__________。
(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是____________________________________________________________________。
(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____________________________________________________________________
(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_______酶。
(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了______________________________________
(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在____________________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。
（8）cDNA探针是目前应用最为广泛的一种探针。制备cDNA探针时，首先需提取、分离获得__________作为模板，在__________的催化下合成cDNA探针
（9）基因工程中利用乳腺生物反应器生产
-抗胰蛋白酶，应选用__________切割含有目的基因的DNA片段和载体，并用__________方法导入__________中，再利用SRY探针 （Y染色体上的性别决定基因）进行检测，将检测反应呈__________（选填“阳”、“阴”）性的胚胎进行移植培养。
斑马鱼的酶D由17号染色体上的D基因编码。具有纯合突变基因（dd）的斑马鱼胚胎会发出红色荧光。利用转基因技术将绿色荧光蛋白（G）基因整合到斑马鱼17号染色体上，带有G基因的胚胎能够发出绿色荧光。未整合G基因的染色体的对应位点表示为g。用个体M和N进行如下杂交实验。
（1）在上述转基因实验中，将G基因与质粒重组，需要的两类酶是____________和____________ 。将重组质粒用____________方法导入到斑马鱼受精卵中，整合到染色体上的G基因____________后，使胚胎发出绿色荧光。
（2）根据上述杂交实验推测：
①亲代M的基因型是（ ） （选填选项前的符号）。
a. DDgg b. Ddgg
②子代中只发出绿色荧光的胚胎基因型包括（ ） （选填选项前的符号）。
a. DDGG b. DDGg c. DdGG d. DdGg
（3）杂交后，出现红·绿荧光（既有红色又有绿色荧光）胚胎的原因是亲代（填“M”或“N”）的初级精（卵）母细胞在减数分裂过程中，同源染色体的_______发生了交换，导致染色体上的基因重组。
请阅读下列几段文字后回答：
（一）A．有人把蚕的DNA分离出来，用一种酶“剪切”下制造丝蛋白的基因，再从细菌细胞中提取一种叫“质粒”的DNA分子，把它和丝蛋白基因拼接在一起再送回细菌细胞中，结果，此细菌就有生产蚕丝的本领。
B．1991年，我国复旦大学遗传所科学家成功的进行了世界上首例用基因疗法治疗血友病的临床实验。
（1）这些实验属于___________工程，所有这些实验的结果，有没有生成前所未有的新型蛋白质？____________。
（2）A段中实验结果的细菌能生产蚕丝，说明__________。在将质粒导入大肠杆菌时，一般要用____________处理该菌，以使处于 ____________ 细胞状态，以便吸收周围环境中的DNA分子。
（3）人类基因组计划（HGP）测定了人体中 ___________ 条染色体的双链DNA分子的脱氧核苷酸序列，B段中血友病基因疗法中有关的染色体是 ____________ 染色体。
（二）科学家通过对鼠和人控制抗体产生的基因进行拼接，实现了对鼠源杂交瘤抗体的改造，生产出对人体的不良反应减少、效果更好的鼠—人嵌合抗体，用于癌症治疗。
(1)鼠源杂交瘤抗体就是从免疫小鼠的脾脏细胞中获取B淋巴细胞，在诱导剂的作用下与________融合，形成____________细胞，并通过体内培养或体外培养生产单克隆抗体。这种抗体与普通血清抗体相比较，最主要的优点在于__________________________，可大量制备。
(2)与植物原生质体的融合相比，动物细胞融合在诱导融合方法方面的主要区别是还常用________________________诱导融合。
操纵元是原核细胞基因表达调控的一种组织形式，它由启动子、结构基因(编码蛋白基因)、终止子等部分组成。如图表示某原核细胞中核糖体蛋白(RP)合成及调控过程，图中①② 表示生理过程，mRNA上的RBS是核糖体结合位点。请回答下列问题：
(1)据题干信息推测启动子的结构上有与 酶结合的位点，终止子的基本组成单位是 ，该操纵元复制的方式为 ，复制过程遵循 原则。
(2)过程①在该细胞中进行的主要场所是________，RP1中有一段氨基酸序列为“—丝氨酸—组氨酸—谷氨酸—”，转运丝氨酸、组氨酸和谷氨酸的tRNA上的反密码了分别为AGA、GUG、CUU，则基因1中决定该氨基酸序列的模板链碱基序列为________________。
(3)图示表明，当细胞中缺乏足够的rRNA分子时，核糖体蛋白RP1能与mRNA分子上的RBS位点结合，从而导致mRNA ，终止核糖体蛋白的合成。
(4) ②过程所需模板上3个相邻的碱基称为 ，合成RP1与RP2所需的原料为 ，若RP2为1条链状结构且其基本单位为78个，则脱去的水分子数为 。
14分）、某质粒上有SalI、HindⅢ、BamHI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如下图所示，请回答下列问题。
(1)将抗盐基因导入烟草细胞内,使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状(变异性状)的来源属于______ 。
(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞,一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能复制，也不能______ 。
(3)在构建重组质粒时,应选用______ 和_____ _两种酶对______ 和_____ _进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
(4)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌。
培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有______ 、_____ _。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是______ 菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的______ 作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌烟草植株从 水平鉴定烟草植株的耐盐性。
(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_______ 技术，愈伤组织经______ 进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加 。
(10分)普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短。为了培育新的棉花品种，科研人员构建了反义GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，成功获得转基因棉花品种，具体过程如下。请分析回答：
（1）①和②过程中所用的限制性内切酶分别是 、 。
（2）基因表达载体除了图示组成外，还应有终止子和 。
（3）③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正义基因表达载体获得0.05kb、3.25kb、5.95kb、9.45kb四种长度的DNA片段，则用NotⅠ酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是 和 。
（4）④过程中利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程中，在 溶液环境中用 酶来制备原生质体。转化后的细胞再通过 形成植物体。
（5）导入细胞内的反义GhMnaA2转录的mRNA能与细胞内的GhMnaA2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达，其意义是 。
基因工程打破了物种之间交流的界限，为花卉育种提供了新的技术保障。下图为花卉育种的过程（字母代表相应的物质或结构，数字代表过程或方法）。
（1）②所常用的方法是______，检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，需要采用______技术。
（2）除a外基因表达载体中还必须包含的部分是启动子、终止子和_________。
（3）培育转基因花卉主要运用了转基因技术和 技术。③、④过程的理论依据是__________.
降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图。在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：
（1）Klenow酶是一种_______酶，合成的双链DNA有_______个碱基。
（2）获得的双链DNA经EcoRⅠ（识别序列和切割位点-G↓AATTC-）和BamHⅠ（识别序列和切割位点-G↓GATCC-）双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它有_________________________的优点。
②设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是___________________________。
③要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含有_______________。
（3）经DNA测序表明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是_______________。
花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图：
据图回答下列问题：
（1）过程①所需要的酶是 ，过程②体现了生物膜的 特点。
（2）过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的 存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
（3）原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是 。原生质体经过 再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
（4）若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和双亲植株的根尖，通过 、漂洗、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较 。
2007年诺贝尔生理学或医学奖授予马里奥·卡佩基等三位科学家，以表彰他们“在涉及胚胎干细胞和哺乳动物DNA重组方面的一系列突破性发现”。这些发现导致了“基因敲除”技术（通常叫基因打靶）的出现，利用这一技术可以准确地“敲除”DNA分子上的特定基因，从而为研究基因功能开辟了新途径。该技术的过程大致如下：
第一步：分离胚胎干细胞。从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞，在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。
第二步：突变DNA的体外构建。获取与靶基因同源的DNA片断，利用基因工程技术在该DNA片段上插入neoR基因（新霉素抗性基因），使该片段上的靶基因失活。
第三步：突变DNA与靶基因互换。将体外构建的突变DNA转移入胚胎干细胞，再通过同源互换，用失活靶基因取代两个正常靶基因中的一个，完成对胚胎干细胞的基因改造。
第四步：将第三步处理后的胚胎干细胞，转移到添加新霉素的培养基中筛选培养。
其基本原理如下图所示：
请根据上述资料，回答下列问题：
（1）“基因敲除技术”以胚胎干细胞作为对象是因为胚胎干细胞具有 性。
（2）在第三步中，涉及的变异类型是 。
（3）在靶基因中插入neoR基因的目的 。
（4）假设经过上图表示的过程，研究者成功获得一枚“敲除”一个靶基因的胚胎干细胞，并培育成一只雌性克隆小鼠，则：
①该克隆小鼠的后代是否都含有neoR基因，为什么? ， 。
简述如何利用上述小鼠才能获得符合需要的小鼠： 。
②若该克隆雌鼠与普通小鼠交配，理论上该克隆雌鼠产下抗新霉素小鼠与不抗新霉素小鼠的比例为 。
为提高某作物的耐盐性，采用农杆菌介导的转基因技术，将耐盐基因R导入受体细胞，经筛选和培养获得若干单拷贝（体细胞中只有1个耐盐基因）转基因耐盐植株，其中3株能在中盐浓度条件下开花结实。若对其中1株（甲）自交后代进行耐盐性检测，结果为耐高盐25株、耐中盐49株、不耐盐26株。
请回答：
（1）农杆菌介导的转基因过程中，目的基因与质粒经相应的 切割，再用DNA连接酶连接，形成 。通常根据质粒中设计的抗生素 ，在培养基中添加该种抗生素筛选转化细胞，再进行目的基因等的鉴定。
（2）甲自交后代中耐盐性状的分离比与单基因 遗传的性状分离比相同。由此推测转基因植株的耐盐性状是由核基因控制的，耐盐基因已整合到细胞核中的 上。该基因的转录产物经加工成为 ，再转移到 中翻译出相应的蛋白质。
（3）请用遗传图解表示甲自交产生后代的过程（用R+表示有耐盐基因，R-表示无耐盐基因）。
植物被野生型农杆菌感染后会产生瘤状结构（类似愈伤组织），主要原因是农杆菌的Ti质粒中含有生长素合成基因、细胞分裂素合成基因和冠瘿碱合成基因。冠瘿碱是农杆菌生命活动必需的有机物质，而植物自身不能合成和利用。下列叙述错误的是
| A．去除生长素合成基因，瘤状结构会生出许多根 |
| B．去除冠瘿碱合成基因，农杆菌在被感染植物体内不能大量繁殖 |
| C．去除生长素合成基因和细胞分裂素合成基因，不会产生明显的瘤状结构 |
| D．为获得正常生长的转基因植物，应去除Ti质粒中的上述3种基因 |
如图18所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000对碱基)上相应的E—F区域 (0.2kb)，
(1)那么所形成的重组质粒pZHZ2___________。
| A．既能被E也能被F切开 | B．能被E但不能被F切开 |
| C．既不能被E也不能被F切开 | D．能被F但不能被E切开 |
(2)已知在质粒pZHZl中，限制酶G切割位点距限制酶E切割位点0.8kb，限制酶H切割位点距限制酶F切割位点O.5kb。若分别用限制酶G和H酶切两份重组质粒pZHZ2样品，据表4所列酶切结果判断目的基因的大小为___________kb；并将目的基因内部的限制酶G和H切割位点标注在图19中。
(3)若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则应该选择的受体细胞是______。若pZHZ2进入细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子山羊的方式是__________。
(4)上述目的基因模板链中的TGA序列对应一个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是________。
试题篮
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